口腔颌面部疼痛相关MiRNAs在p38 MAPK信号传导中的作用及机制研究

口腔颌面部疼痛机制复杂，是目前口腔医学界研究的难题。我们前期研究表明p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的激活参与了大鼠牙髓炎性疼痛传导，p38 MAPK特异性拮抗剂SB203580能够显著降低炎症侧三叉神经节中反映疼痛严重程度的降钙素基因相关肽（CGRP）表达。鉴于1）p38 MAPK磷酸化后介导应激、炎症和神经病理性疼痛；2）某些MiRNAs在咬肌炎性疼痛和脊髓神经病理性疼痛大鼠的初级传入神经元中下调表达；3）MiRNAs和p38 MAPK信号通路共同参与机体诸多病理过程，推测p38 MAPK可能在疼痛相关MiRNAs的直接调控下参与口腔颌面部疼痛传导。本课题拟借助大鼠急性牙髓炎模型，筛选与牙髓炎和疼痛相关的MiRNAs，阐述MiRNAs和p38 MAPK信号通路在促进CGRP产生、诱导疼痛发生发展中机制，为探讨口腔颌面部病理性疼痛机制提供新思路，为疼痛治疗提供新靶点。

口腔颌面部疼痛是非常棘手的临床问题，其特异的分子机制目前尚不清楚。本文目的是筛选口腔颌面部疼痛大鼠三叉神经节中差异表达的microRNAs （miRNAs），同时探索miR-125a-3p在疼痛中的潜在作用。利用完全弗氏佐剂（CFA）面部注射三叉神经分布区域的皮肤建造大鼠口腔颌面部炎性疼痛的模型，以生理盐水作为阴性对照。CFA注射引起同侧三叉神经节32个miRNAs的差异表达，随即根据以下标准选取miRNAs进行PCR验证：差异倍数超过6并且具有显著性意义 (p < 0.01)；以往文献报道存在于三叉神经节中；以往文献报道与炎症和疼痛过程相关。结果显示PCR结果与miRNAs芯片结果一致，miR-24-2*、-26a和-183上调表达，miR-23a*、-92a、-125a-3p和-299下调表达。靶基因预测和基因本位论（GO）分析发现上述miRNAs的靶基因如Pax、MAPK、NMDA和COX基因等参与体内多种生物学过程以及一些特殊的生物学过程，如炎症和疼痛过程。miR-125a-3p的靶基因参与神经冲动传递、神经元动作电位调控、炎症反应的调控、突触传递和膜电位调控等。与对照组相比，p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38 MAPK）和降钙素基因相关肽（CGRP）表达上调。miR-125a-3p的表达与p38 MAPK和CGRP的表达具有显著负相关性，同时与反映疼痛严重程度的缩头阈值呈显著的正相关。利用小鼠神经母细胞瘤和大鼠神经元杂交细胞株ND8/34转染miR-125a-3p后，p38 MAPK mRNA和蛋白的表达均显著降低。随即构建了p38 MAPK 3’UTR含有与miR-125a-3p潜在结合位点的野生型和突变型质粒，和miR-125a-3p共转染ND8/34细胞株。结果发现转染野生型质粒后，miR-125a-3p的过表达显著降低了Luciferase活性，而抑制剂显著升高了活性，均具有显著的剂量依赖性，但在转染突变质粒中该活性无显著变化。该结果表明miR-125a-3p通过直接与3’UTR相结合，调控p38 MAPK的表达，p38 MAPK是miR-125a-3p的直接靶基因。因此，miR-125a-3p参与口腔颌面部炎性疼痛的发展和维持可能是通过p38 MAPK信号通路完成的。miR-125a-3p可能成为一个潜在的疼痛标志物和治疗靶基因。