牛病毒性腹泻病毒E2蛋白中和抗原表位筛选及其合成肽抗原特性研究

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)病是普遍存在而且严重影响奶牛生产重要传染病，对其免疫防制方面目前还没有好的办法。本项目的总体思路是利用噬菌体展示技术筛选牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白的模拟抗原表位，通过筛选出的拟表位合成多肽进行其免疫原性研究，为利用多肽疫苗防制BVDV奠定基础。在研究过程中采用BVDV E2单克隆抗体作为靶标，对噬菌体展示随机肽库进行筛选，通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选阳性克隆，用免疫印迹进行验证，进一步对阳性克隆进行测序分析；应用单克隆抗体中和活性抑制试验和免疫荧光抑制试验，研究不同(拟)表位与单克隆抗体中和活性及与病毒抗原蛋白结合力；应用筛选出具有抗原活性的多肽片段，以树状多抗原肽（MAP）偶联合成多表位抗原在动物模型上进行抗原性评价，筛选出动物免疫力和保护力较好的侯选多肽疫苗。

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)囊膜表面蛋白E2是病毒诱导中和抗体及激发保护免疫应答的主要抗原蛋白。也是宿主细胞识别、吸附的主要蛋白。本研究以抗BVDV的单克隆抗体5C2和2G3，筛选M13噬菌体展示的12肽随机多肽库，进行BVDV E2蛋白表位分析。2G3单克隆抗体存在E2蛋白的抗原表位，其基序位于该病毒E2蛋白764-769位氨基酸（RALPTS）是BVDV的特异性表位。而5C2单克隆抗体未获得相关表位序列。应用ELISA、阻断ELISA、免疫印迹、抗体中和活性的抑制试、免疫荧光抑制试验，鉴定拟表位对单克隆抗体的免疫反应差异。单克隆抗体2G3与重组E2蛋白结合后，对拟表位噬菌体具有免疫抑制作用。应用基序（RALPTS），以树状多抗原肽（MAP）偶联合成表位抗原，在小鼠上进行抗原性评价，免疫小鼠后能够产生针对多肽的抗体。