RhoA/ROCK通路介导NHE1极性分布在胃癌细胞腹腔转移侵袭表型形成中的作用及机制研究

胃癌腹腔转移是脱落的游离胃癌细胞与腹腔微环境相互作用的结果，胃癌细胞在早期腹腔酸性微环境中通过何种机制实现表型重塑发生演进，目前尚不清楚。结合文献复习和项目组前期研究结果，发现NHE1基因可能在腹腔游离胃癌细胞恶性演进中发挥重要作用，但其具体机制有待进一步深入研究。本课题拟以体外模拟血供匮乏的酸性培养条件下的不同腹膜转移潜能胃癌细胞株，和活细胞示踪胃癌原位移植腹腔转移动物模型为实验对象，应用激光共聚焦显微镜、免疫荧光、分子生物学相关技术及小动物体内发光技术，证实在胃癌细胞腹腔转移早期血供相对匮乏的酸性微环境条件下，NHE1基因在Rho/ROCK信号通路下游被激活，极性分布于细胞侵袭前沿，介导细胞骨架系统重排和细胞表型重塑，参与恶性侵袭表型形成，从而深入揭示腹腔游离胃癌细胞在酸性微环境中发生恶性演进的分子机制，为合理选择胃癌腹腔转移的防治策略提供新的思路。

全球每年新增近一百万胃癌患者，约有700万胃癌患者死亡。腹腔种植转移是进展期胃癌最常见的转移形式，它是脱落的游离胃癌细胞与腹腔微环境相互作用的结果。钠氢交换蛋白（NHE1）是维持胃癌细胞内pH值稳定的重要跨膜蛋白，在肿瘤细胞内的分布、活性和表达均与正常细胞不同，推测NHE1基因可能在腹腔游离胃癌细胞恶性演进中发挥重要作用，但具体机制不清。. 因此本课题收集人体胃癌组织标本，检测胃癌组织中与癌旁正常组织中NHE1表达情况，分析与临床病理资料的关系，证实NHE1与胃癌侵袭转移的相关性。体外模拟血供匮乏的酸性微环境，培养腹腔种植转移潜能不同的胃癌细胞株，应用激光共聚焦技术检测NHE1的活性改变，阻断NHE1作用后，观察细胞骨架和细胞迁移能力的变化，采用分子生物学相关技术检测胃癌细胞内NHE1的表达变化，证实了在胃癌细胞腹腔种植转移早期血供相对匮乏的酸性微环境条件下，NHE1基因影响细胞迁移，介导细胞骨架重排，参与恶性侵袭表型的形成，在胃癌腹腔种植转移中的重要作用。在此基础上，验证了NHE1受到RhoA信号通路调控。建立裸鼠皮下移植瘤模型和腹腔移植瘤模型，腹腔注射NHE1和RhoA阻断剂，检测移植瘤大小、重量、转移结节数目以及检测瘤体内NHE1、细胞骨架蛋白和RhoA的变化，在小动物体内进一步证实了NHE1在胃癌腹腔种植转移中的作用。. 本研究结果将为人们深刻认识腹腔微环境在胃癌腹腔种植转移中的作用，从而合理选择胃癌腹膜种植转移的预防和治疗策略提供新的思路。