Neuritin与Syap1的相互作用在神经突触生长发育中的作用及机制研究

Neuritin，一个维持神经元存活并促进神经突起生长分支的神经营养因子，确切作用机制仍不清楚。本课题组研究发现：Neuritin与Syap1有相互作用，提示：Neuritin与Syap1可能存在功能上的内在联系，两者共同参与体内神经突触的生长发育调节过程，且Syap1是在神经元中特异表达的向轴突终末转运的蛋白，相对更直接地影响突触生长发育。我们推测：Neuritin的作用机制之一是作为上游因子，通过与Syap1的相互作用，促进突触生长发育。故本研究首先利用免疫共沉淀技术进一步验证Neuritin与Syap1的相互作用；再利用基因表达技术和RNA干扰技术，分别观察Neuritin过表达和表达降低对细胞中Syap1水平以及突触生长发育的影响，旨在进一步明确Neuritin与Syap1的关系，探讨Neuritin可能的作用机制，为深入研究神经再生与神经系统可塑性的分子机制奠定理论基础。

Neuritin，一个维持神经元存活并促进神经突起生长分支的神经营养因子，确切作用机制仍不清楚。本课题组研究发现：Neuritin与Syap1有相互作用，提示：Neuritin与Syap1可能存在功能上的内在联系，两者共同参与体内神经突触的生长发育调节过程，且Syap1是在神经元中特异表达的向轴突终末转运的蛋白，相对更直接地影响突触生长发育。我们推测：Neuritin的作用机制之一是作为上游因子，通过与Syap1的相互作用，促进突触生长发育。 . 故本研究首先构建了Neuritin与Syap1真核表达载体，利用免疫共沉淀技术,通过正向和反向检测，结果证实：在293T细胞中Neuritin蛋白与Syap1蛋白发生了相互作用；通过RT-PCR、Western-Blot检测发现：293T、SY5Y、pc12细胞中可见内源性Neuritin表达，而hella、Hep G、ECA109等未见表达；以上几种细胞株仅SY5Y细胞可见Syap1表达，其余细胞均未见Syap1表达；利用间接免疫荧光技术，鉴定了Syap1蛋白在293T细胞中定位于胞浆及胞膜；利用荧光双标技术，检测到Neuritin与SYAP1蛋白在SY5Y细胞中共定位于胞膜；再利用基因表达和免疫荧光技术，检测到Neuritin过表达时，Syap1水平降低，同时引起Syap1向突触终末转运，促进突触生长；利用基因工程技术构建了Neuritin干扰载体，并确证其对Neuritin干扰效果；利用RNA干扰技术，观察到Neuritin表达降低时，Syap1水平升高，未见明显Syap1转运，突触生长受到一定抑制。. 本研究观察到的Neuritin过表达和表达降低对对细胞中Syap1水平以及突触生长发育的影响，对于进一步明确Neuritin与Syap1的关系，探讨Neuritin可能的作用机制，及深入研究神经再生与神经系统可塑性的分子机制提供了实验依据，及其理论基础。