microRNA129-5p对PD腹膜组织细胞EMT的作用与分子机制

长期接受腹膜透析（PD）的腹膜组织常出现腹膜纤维化而降低透析效能，但其原因尚不清楚。近期研究证明TGF-β1介导的上皮细胞转分化（EMT）在其中可能起关键作用。小分子miRNA是TGF-β1信号通路中新发现的调控分子，故从miRNA入手研究TGF-β1信号分子转录调控是近期生命科学研究的热点。我们研究发现：在PD过程中异常表达的miRNA可能介导TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞EMT形成。本项目结合申请者以往的研究基础，以miRNA-129-5p为切入点，以TGF-β1下游的SIP1为靶蛋白，以PD过程中腹膜间皮细胞EMT为主攻方向，用分子生物学技术，探讨TGF-β1诱导miRNA-129-5p及miRNA-129-5p对转录因子SIP1表达调控的分子机制，并构建、纯化miRNA-129-5p慢病毒，观察其对PD动物模型腹膜组织EMT的影响，旨为防治PD腹膜纤维化提供新的理论基础与干预措施。

miRNA是否参与腹透（PD）腹膜间皮细胞（HPMCs）转分化（EMT)尚不清楚。在本项目资助下，我们开展了PD患者腹透流出液腹膜间皮细胞microRNA array，对miR-129-5p调节TGF-β1诱导的HPMCs细胞EMT展开研究。发现91个 microRNA表达异常，miRNA-129-5p明显下降；上皮标志物E-cadherin和claudin1表达下降，间皮标志物Vimentin、FN表达增加， TGF-β1、SIP1、SOX4表达增加。体外研究表明：TGF-β1引起HPMCs细胞miR-129-5p表达下降，而pre-miRNA-129-5p可减轻HPMCs转分化。进一步发现，pre-miRNA-129-5p可抑制TGF-β1诱导的SIP1和SOX4蛋白高表达，SIP1-siRNA和SOX4-siRNA可抑制TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞EMT。另外，miR-129-5p还可抑制SIP1和SOX4的3’-UTR活性，提示miRNA-129-5p通过转录后抑制下游因子SIP1和SOX4调节TGF-β1诱导的HPMCs转分化（Lab Inv,revised;中华肾脏病杂志，revised ）。体内研究发现：慢病毒介导的miRNA-129-5p可减轻PD小鼠腹膜纤维化；并抑制HPMCs细胞EMT和SIP1表达。因此，我们提出“腹透液MicroRNAs 可作为诊断PD腹膜纤维化的生物标记物”（Med Hypo, 2012*）及“尿miRNAs是诊断早期DN的生物标记物”（Med Hypo,2013*）。另外，发现Wnt/β-catenin与EMT和纤维化关系密切（BioMed Research International，2013*；Physiol. Res,2012 *）。同时，还阐明“PI3K/Akt通过USP4和smurf2调节TGF-β1诱导的HPMCs细胞EMT（中华肾脏病杂志，2014 *；BMC Cell Biology， revised）。本项目探讨了PD腹膜纤维化分子机制，初步揭示了miR-129-5p在PD腹膜间皮EMT中的作用与机理，将为PD腹膜纤维化提供新的理论依据，并为其防治提供新的靶分子。在项目资助下，尚探讨了“糖尿病肾病小管损伤”研究，论文发表在Diabetes（IF8.45）等杂志。.*上述发表的五篇论文均注明有本项目资助