“补肾健脾方”对多囊卵巢综合征大鼠模型PI-3K/AKT信号通路的调控

多囊卵巢综合征（PCOS）是常见、复杂和难治的生殖内分泌失调，是糖代谢异常与生育障碍相关联的一种特殊疾病。其代谢异常，主要表现为肥胖、糖耐量低减和血脂代谢异常等，以"胰岛素抵抗"为关键病机。研究发现，PCOS的胰岛素抵抗存在于骨骼肌、脂肪和结缔组织等经典靶器官。在临床上PCOS表现两个主要证型，即脾肾阳虚痰实型和肝肾阴虚、痰瘀交阻。近年来，对阴虚痰瘀的 PCOS治疗，多采用滋阴补肾健脾法，"补肾健脾方"是代表方，临床取得良好疗效，而其对PCOS胰岛素抵抗的疗效机理尚不清楚。前期研究证明，出生前高雄化（PNA）大鼠有生殖及代谢异常，符合PCOS临床特征。本课题从整体和局部水平，研究补肾健脾方及其安慰剂，对多囊卵巢综合征大鼠模型全身糖脂代谢的影响以及骨骼肌和肝脏组织内糖代谢调节的关键信号分子表达和磷酸化的调控，阐明补肾健脾方治疗PCOS代谢异常的疗效机制，为临床防治其远期代谢并发症提供依据。

在体外培养PCOS卵巢颗粒细胞和构建出生前雄激素化（PNA）大鼠模型的基础上，分别探讨隐丹参酮对于改善PCOS患者颗粒细胞激素分泌和糖代谢异常的调节机制以及宫内高雄激素环境对子代行为的影响以及产生焦虑行为的可能机制。方法：（1）PCOS卵巢颗粒细胞分别用隐丹参酮或AMP激活蛋白激酶（AMPK）激活剂——AICAR干预48h，细胞培养结束后，利用化学发光法检测各组细胞培养液上清中的孕酮、睾酮和雌二醇水平。采用葡萄糖测定试剂盒检测细胞培养液上清中的残糖量。利用荧光定量PCR技术检测各组颗粒细胞中AMPK、类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3βHSD）、17α羟化酶/17,20裂链酶（CYP17）、细胞色素P450（CYP19）和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA的表达。2）Wistar雌性大鼠，随机分为四组，分别在孕15-19天皮下注射芝麻油、丙酸睾丸酮（T）、T/氟他胺(T + Flut)及T/它莫西芬(T + Tam)，以其所生子代雌鼠及雄鼠长至成年作为实验对象。实施高空十字迷宫和旷场实验来观察雌雄子代焦虑行为表现，检测中枢神经系统下丘脑、海马和杏仁核中关键基因的表达情况。结果表明：（1）隐丹参酮能改善PCOS卵巢颗粒细胞胰岛素敏感性，降低激素合成酶的表达抑制雄激素的合成。（2）AMPK途径可能是隐丹参酮改善PCOS糖代谢异常和雄激素过多的作用机制。（3）PNA大鼠焦虑行为表现更为明显，其异常的变现是通过雄激素而不是雌激素途径来发挥作用。.本项课题在研期间共发表8篇论文，其中SCI论文1篇。获得2项科研奖励和1项发明专利。