两种茶尺蠖幼虫唾液蛋白抑制茶树多酚氧化酶活性的分子机理

本项目将在国内外现有研究工作的基础上，结合本课题组在茶树直接防御反应研究中所积累的工作基础，以茶树-茶尺蠖为研究系统，利用分子生物学、分析化学以及昆虫学等研究技术，通过研究健康茶苗、茶尺蠖幼虫取食、机械损伤、机械损伤加唾液处理后茶树叶片中PPO基因家族各成员转录水平的变化，明确与茶尺蠖幼虫取食抑制茶树PPO活性有关的PPO基因成员；通过对茶尺蠖幼虫唾液中已分离到的2种蛋白测序、基因克隆与体外表达，并测定其处理后茶树叶片PPO活性及相关PPO基因成员表达量的变化，明确这2种蛋白抑制茶树PPO活性的异同点；通过测定2种蛋白处理后茶树中4种信号分子含量的变化及其与茶尺蠖幼虫取食、机械损伤等所诱导的信号分子的异同，结合测定外用信号分子处理后相关PPO基因转录水平的变化，阐明茶尺蠖幼虫2种唾液蛋白抑制茶树PPO活性的分子机理。

本项目克隆了2个与茶尺蠖幼虫唾液分泌蛋白相关的基因全长，与NCBI库中已有基因的比对结果表明：两个基因的编码蛋白属于昆虫的消化酶类。进化关系的分析结果表明：1号蛋白与柑橘凤蝶唾液腺中的相关蛋白亲缘关系最近，与果蝇属昆虫的亲缘关系最远；2号蛋白与豌豆蚜唾液腺中的相关蛋白进化关系最近，与伊蚊和印度跳蚁的亲缘关系最远。利用原核表达系统，成功获得了2种唾液蛋白，目前正在对其进行生物活性与功能检测。本项目的研究结果为阐明茶尺蠖幼虫取食诱导的茶树防御反应机理奠定了基础。