栀子豉汤中生物转化产物京尼平-酪氨酸衍生物的抗抑郁作用机制研究

栀子豉汤出自《伤寒论》，主治"虚烦不得眠"、"心中懊憹"，现代研究证实其具有抗抑郁作用。根据古方中栀子先煎，豆豉后下的记载，我们推测栀子中的药效成分栀子苷先煎溶出，被后下豆豉中的β-葡萄糖苷酶水解生成苷元京尼平，再与豆豉中含量较高的酪氨酸反应生成单萜生物碱类成分- - 京尼平-酪氨酸衍生物(Genipin-Tyrosine Derivatives)。课题组前期开展的药效学实验证实了京尼平-酪氨酸衍生物的抗抑郁作用明显优于京尼平，而栀子苷只有长时间给药才显示较弱的抗抑郁作用。现代研究认为第二信使cAMP、cGMP与中医的"阴阳"理论有密切的联系，结合抑郁症发病机制的理论研究进展及抗抑郁药物靶点发现的研究趋势，本研究拟从cAMP-PKA-CREB-BDNF和NO-cGMP-PKG细胞信号转导通路阐述京尼平-酪氨酸衍生物抗抑郁作用分子机制，为基于传统中药的抗抑郁新药发现和高内涵药物筛选提供理论依据。

栀子豉汤出自《伤寒论》，主治“虚烦不得眠”、“心中懊憹”，现代研究证实其具有抗抑郁作用。根据古方中栀子先煎，豆豉后下的记载，我们推测栀子中的药效成分栀子苷先煎溶出，被后下豆豉中的β-葡萄糖苷酶水解生成苷元京尼平，再与豆豉中含量较高的酪氨酸反应生成单萜生物碱类成分——京尼平-酪氨酸复合物(Genipin-Tyrosine Complexes)。课题组以高纯度的栀子苷、β-葡萄糖苷酶和氨基酸采用替代模拟的方法验证了研究假说，以正交实验和反应动力学研究，优化了京尼平-酪氨酸复合物的制备工艺。通过硅胶柱色谱纯化，得到了一个单萜生物碱类单体化合物，经红外光谱、核磁共振波谱和质谱分析，解析了化合物的结构。以小鼠强迫游泳实验、悬尾实验和大鼠慢性不可预见性温和应激实验作为抑郁症动物模型，对京尼平-酪氨酸复合物开展了抗抑郁的药效学评价。研究结果表明，京尼平-酪氨酸复合物的抗抑郁效果优于京尼平。开展了基于大鼠慢性不可预见性温和应激实验的分子药理学研究工作，从cAMP-PKA-CREB-BDNF和NO-cGMP-PKG细胞信号转导通路研究了京尼平-酪氨酸复合物抗抑郁作用分子机制，研究结果表明，京尼平及京尼平-酪氨酸复合物可通过上调BDNF的表达和下调NO的水平发挥抗抑郁作用。同时，在细胞模型上研究了京尼平氨基酸复合物下调NO水平及抑制NF-κB激活的分子机制，结果表明京尼平-氨基酸复合物作为NF-κB激活的抑制剂，是其抗炎及抗抑郁等药理活性的分子机制。该机制的研究结果获得了中国发明专利的授权，研究论文发表3年内被国际同行引用30余次，并被天然产物研究领域著名学者RAA Muzzarelli教授在综述中重点介绍。本研究为基于传统中药的抗抑郁新药发现和高内涵药物筛选提供了理论依据和方法学示范。