基于lncRNA-CCAT1/miR-7-5p靶向作用EZH2探讨澳洲茄边碱抑制鼻咽癌生长的分子机制

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is one of the most common malignant tumors. Radiotherapy and chemotherapy are the main treatment for NPC, but some patients fail to treat NPC for many reasons, such as intolerance to radiotherapy and chemotherapy. Therefore, it is necessary to find new therapeutic approaches and drugs for NPC and explore the molecular mechanisms that lead to or promote the occurrence and development of NPC. Solamargine (SM) inhibits the growth of various malignant tumors. Previous studies have shown that SM can effectively inhibit the growth of NPC cells and tumors, reduce the expression of lncRNA-CCAT1 and increase the expression of microRNA-7-5p, inhibit the expression of EZH2 and SP1. It is preliminarily speculated that SM can inhibit the growth of NPC through lncRNA-CCAT1/microRNA-7-5p/Sp1/EZH2 signaling network. This study plans to establish a nude mouse model of NPC, to clarify the effect of abnormal expression of EZH2 on the growth of NPC. In vitro experiments, using FCM, quantitative PCR, ChIP-PCR, RNA pull-down and other advanced methods, to study the mediated effect of lncRNA-CCAT1/miR-7-5p/Sp1/EZH2 signaling pathway of SM and the modulation network. To provide experimental basis for the clinical application and medicinal development of SM in the treatment of NPC.

鼻咽癌是常见的恶性肿瘤之一。放疗和化疗为鼻咽癌的主要治疗手段，但部分患者因为对放化疗不能耐受等诸多原因导致治疗失败，因此，需要进一步寻找新的抗鼻咽癌治疗途径和药物，探索有关导致或促进鼻咽癌发生发展的分子机制。前期研究表明，澳洲茄边碱（SM）能有效抑制鼻咽癌细胞和肿瘤的生长，降低lncRNA-CCAT1和增加miR-7-5p的基因表达，抑制EZH2和Sp1的表达；初步推测SM可通过lncRNA-CCAT1/miR-7-5p/Sp1/EZH2信号网络抑制鼻咽癌生长。本研究计划建立鼻咽癌裸鼠肿瘤模型，明确EZH2等异常表达对鼻咽癌生长的影响；体外实验采用FCM、定量PCR、ChIP-PCR和RNA pull-down等多种先进方法，研究lncRNA-CCAT1/miR-7-5p/Sp1/EZH2信号轴对SM抗鼻咽癌生长的介导效应和调控网络，为SM在治疗鼻咽癌的临床应用及其药用开发提供实验依据。

鼻咽癌是常见的恶性肿瘤之一，占头颈部肿瘤发病率首位。尽管放疗、化疗、分子靶向治疗和免疫治疗在鼻咽癌治疗上取得了新的进展，但放化疗及其它疗法所导致的毒副作用也限制了其应用，从而导致治疗的失败。因此探索新的抗鼻咽癌治疗途径和药物，以及促进鼻咽癌发生发展的分子机制，包括新的临床治疗靶点，对改善中晚期鼻咽癌患者的生活质量和生存率具有重要现实意义。本研究通过多种先进的研究方法揭示了澳洲茄边碱可显著抑制鼻咽癌的生长、增殖、侵袭和转移，并促进细胞凋亡。在机制方面，我们发现Sp1和EZH2可能是澳洲茄边碱发挥抑癌作用的关键靶分子。以此为研究基础，本项目详细阐述了澳洲茄边碱抑制鼻咽癌生长和转移的分子作用机制。一方面：澳洲茄边碱通过抑制长链非编码RNA CCAT1，同时上调miR-7-5p的表达，CCAT1和miR-7-5p相互作用并直接调控Sp1基因的启动子活性和蛋白水平，Sp1可以调控EZH2启动子的活性，最终抑制鼻咽癌的生长。另一方面：本研究进一步探讨了澳洲茄边碱调控鼻咽癌细胞侵袭和转移的分子机制，研究发现澳洲茄边碱通过调控VEGFA，EZH2以及相关转移相关基因HIF-1α，Vimentin和Snail的表达，并通过调控VEGFA和EZH2的关系抑制转移的发生，而EZH2的过表达能抵消澳洲茄边碱的抗鼻咽癌作用。综上，本项目揭示了澳洲茄边碱对鼻咽癌生长和转移的重要影响；明确了Sp1和EZH2在鼻咽癌中的重要作用以及它们之间的调控关系；通过对CCAT1/miR-7-5p/Sp1/EZH2/VEGFA这条轴线的阐述，明确了澳洲茄边碱的可能作用机制；并深入研究靶蛋白之间的‘交叉对话’和整体调控网络。通过体外和体内实验验证澳洲茄边碱的抗癌活性和多靶效应，为中药单体的抗肿瘤研究和临床转化提供了切实可行的研究思路和实验依据。