凝血系统在慢性自发性荨麻疹中的作用及机制研究

In this study, the role of the coagulation system in Chronic Spontaneous Urticaria (CSU) and the mechanism of its action are expected to be explored. Based on our preliminary trial, we found that D-Dimer, a fibrin degradation product reflecting the secondary fibrolysis, was increased in the plasma of some CSU patients with poor treatment effect on anti-histamines, and these patients’ clinical symptoms could be relieved by anticoagulant therapy. Besides, we found that the mice mast cell line P815 could be induced to release inflammatory cytokines by stimulation of thrombin. These findings inspire us to do further investigations in the current study by demonstrating the relationship between the plasma level of prothrombin fragment F1+2 and D-Dimer and the severity of CSU, as well as multiple inflammatory mediators, observing the changes of their plasma level after application of anti-coagulation medication, exploring the proinflammatory effect and mechanism of thrombin on the human mast cell line LAD2, and observing the intervention effect of Chinese herbal extract on thrombin. We hope we could identify the role and explore the mechanism of coagulation system in CSU in this study, and provide evidence and proof for thrombin-target therapy of CSU.

本项目研究凝血系统在慢性自发性荨麻疹(Chronic Spontaneous Urticaria, CSU)的作用及机制。项目源于我们前期发现在部分抗组胺药物治疗效果较差的CSU患者血浆中，反映继发性纤溶激活代表因子D二聚体增高，应用具有抗凝作用的药物治疗获得良好效果，以及体外研究中凝血酶具有促小鼠肥大细胞株P815释放炎症介质的重要发现；拟深入研究：CSU患者血浆凝血酶原片段F1+2，D二聚体水平与疾病严重程度关系，与多种炎症介质的关系及应用抗凝药物的治疗效果；凝血酶对人肥大细胞株LAD2的促炎作用与机制，以及中药提取物对凝血酶的干预效果。这些研究不仅可以深入阐明凝血系统的激活在CSU发病中的作用，并能为针对凝血酶靶点治疗CSU的新药开发及可能的产业化发展提供坚实的科学理论依据。

【背景】.凝血系统的激活及其与炎症的相互作用可能参与慢性自发性荨麻疹(CSU)的发病。.本课题拟研究CSU患者凝血系统激活的情况和凝血酶(TM)对人肥大细胞株HMC-1的促炎作用与机制，以期阐明凝血系统的激活与炎症的关系及其在CSU发病中的作用，从而为CSU的治疗提供针对TM靶点的新思路和科学理论依据。.【重要结果及关键数据】.1.临床研究：.1). D-dimer增高患者的F1+2水平增高，UAS评分高；治疗28天后D-dimer和F1+2水平、UAS评分均下降；华法林+氯雷他定组和丹参酮+氯雷他定组评分更低。.2). D-dimer患者血浆组胺、CCL13、GROA和ITB4水平增高,治疗28天后,上述细胞因子明显降低，其中华法林+氯雷他定组和丹参酮+氯雷他定组CCL13、GROA和ITB4水平显著低于其他组（p<0.05）。.2.体外研究：.1).TM能上调HMC-1细胞PAR1，3，4在mRNA水平的表达；.2).TM可促进HMC-1细胞表达TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-23、IL-13、IL-17、CCL5、CCL13、CXC2、CXCL5、GROA、ITB4、PCNA、VEGF；给予TM抑制剂水蛭素和抗凝药物华法林、PAR1、2、4 受体阻断剂后，大部分上述因子的表达明显降低。.3).WB显示：TM能诱导HMC-1细胞抑制性κBα的磷酸化及HMC-1细胞P38、JNK及ERK-1/2途径的活化；给予p38、JNK和ERK1/2抑制剂后能明显抑制部分TM所致的HMC-1细胞释放炎症介质。.【意义】.1. D-dimer和F1+2水平增高的CSU患者病情更重，联合应用具抗凝作用药物和抗组胺药可获得更好疗效。.2. D-dimer增高的患者血浆组胺、CCL13、GROA和ITB4水平增高，联合抗凝和抗组胺治疗后CCL13、GROA和ITB4下降更明显，提示凝血系统激活可能诱导了组胺及其它炎症介质释放。.3.TM可通过作用于肥大细胞表面的PAR1、2、3、4释放炎症介质而参与CSU的发病；炎症介质可被水蛭素、华法林、丹参酮阻断，提示抗凝血酶治疗可能是治疗CSU的一个有效途径。.4. TM激活HMC-1细胞而释放炎症介质的部分生物学机制与NF-κB、P38、JNK及ERK-1/2途径活化有关，阻断这些途径可能成为治疗CSU的新靶点。