基于心肌发育相关基因及wnt信号途径的"化痰生新"理论研究

o..As promoting blood circulation for removing blood stasis, one of the primary assumptions we are questioning is whether Chinese crude drugs of dissipating phlegm can accelerate the tissue repair after myocardial infarction (MI).However, in Chinese , there has been no report about it until now..The study results showed that activating the heart primitive cells can make significant promotion in the tissue repair after myocardial infarction. And genes (such as GATA4/NKX2.5/wnt-fzd) related with Myocardial development play an important part in differentiating primitive cells into cardiomyocytes ..So In order to observe the effect of dissipating phlegm drugs in accelerating the tissue repair after myocardial infarction , we will detect the gene expression of GATA4/NKX2.5/b-catenin in myocardial infarction rats, and detect the number of myocardial cells and blood vessels in scar tissue around the infarcted zone with the light and immunohistochemical method.

依据活血化瘀中药"祛瘀生新"作用的启示，我们假设，在防治"真心痛"中疗效显著的化痰中药也具有"化痰生新"作用。而岂今为止，尚未见到有关化痰中药促进梗死后心肌组织迅速修复的研究报道。.现代研究发现激活心脏原始细胞可显著促进梗死后受损组织的修复。而心肌发育相关基因GATA4和Nkx2.5以及wnt-fzd信号途径在促使心脏原始细胞分化成心肌细胞以及对心梗后梗死区的修复过程均发挥重要作用。.因此，本课题拟通过检测化痰中药对心梗大鼠干预治疗后，大鼠心肌发育相关基因GATA4、Nkx2.5，以及wnt-fzd信号途径中β-catenin表达量及其表达上升/下降时间点的变化，来研究化痰中药调控心肌发育相关基因表达的作用，并采用光镜和免疫组化的方法观察梗死区边缘瘢痕组织内新生心肌细胞及血管数量，从基因及组织病理学层面研究化痰中药促进梗死后心肌组织迅速修复的"生新"作用。

如何促进梗死后心肌组织的修复、愈合以及心肌细胞的再生成为近年来研究的热点。冠心病心肌梗死相当于祖国医学“胸痹心痛”“真心痛”范畴。中医药专家针对 “真心痛”的防治多从化痰祛瘀着手，临床疗效显著，而有关化痰中药促进梗死后心肌组织迅速修复、愈合及心肌细胞再生的研究罕有报道。因此，针对现代医学的研究热点，我们拟以化痰经典方剂“瓜蒌薤白半夏汤《金匮要略》”为代表，来研究化痰中药是否具有促进梗死后心肌组织迅速修复、愈合的积极作用。.本课题拟主要从三个方面来研究瓜蒌薤白半夏汤对心肌梗死大鼠心肌的作用。首先，检测了心肌梗死大鼠的肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（CTnI）、超敏C反应蛋白（hsCRP）和脑钠肽（BNP）。结果发现，大鼠在心肌梗死后给予瓜蒌薤白半夏汤干预治疗，其CK-MB、CTnI、hsCRP、BNP均较心肌梗死模型组有显著的下降（P<0.01）。提示该方剂有一定的抗炎、保护心功能作用。或许正是瓜蒌薤白半夏汤的抗炎功能，起到了减轻大鼠心肌梗死后心肌细胞损伤的作用。.第二，检测了心肌梗死大鼠的组织学变化。分别进行了HE染色、Masson染色、双染细胞检测及β-catenin检测。结果发现经HE染色的大鼠梗死心肌周围均呈粉红色，与周围间质区分不是很清楚。经Masson染色后，胶原纤维显色明显，但比较瓜蒌薤白半夏汤组与心肌梗死模型组之间心肌纤维化的面积却没有显著性差异。同时两组之间的双染阳性细胞也无显著性的差异。经IPWIN软件检测发现，大鼠心梗后给予瓜蒌薤白半夏汤干预治疗1天后大鼠β-catenin的表达已开始增加；10天达高峰；15天后表达减弱，虽然符合心肌梗死后β-catenin表达的变化规律，但与心肌梗死模型组相比差异无统计学意义，提示短期应用瓜蒌薤白半夏汤没有看到显著的加强梗死后心肌细胞粘附的作用。.第三，检测了心肌梗死大鼠的心肌发育相关基因GATA4和Nkx2.5。结果发现大鼠心肌梗死后，给予瓜蒌薤白半夏汤治疗15天后，该组大鼠心肌组织中的GATA4mRNA表达量与假手术组相比有显著性升高，提示瓜蒌薤白半夏汤具有一定的促进GATA4mRNA表达的作用。该基因表达的增加在增加心肌毛细血管和小血管密度、调控冠脉血管生成中起到一定的作用，提示瓜蒌薤白半夏汤可能是通过上调GATA4的表达来促进梗死后心肌组织迅速修复愈合的。