姜黄素对慢性酸反流性食管炎大鼠PKC,NF-кB信号转导途径的影响

本研究主要从动物实验的角度阐述慢性酸反流性食管炎在炎症介质释放及信号转导方面可能的发病机制，阐述应用姜黄素后对炎症的抑制作用及其可能的作用途径。主要从三方面来证实提出的假设：（1）慢性酸反流性食管炎大鼠模型食管细胞间隙，PKC同工酶，NF-кB信号蛋白的表达，炎症介质的释放情况。（2）通过应用PKC同工酶抑制剂，NF-кB抑制剂后观察慢性酸反流性食管炎大鼠模型食管细胞间隙，PKC同工酶，NF-кB信号蛋白表达以及炎症介质释放的变化情况，从而有助于阐明上述两条信号转导通路在慢性酸反流性食管炎大鼠发病中的作用。（3）用姜黄素的处理后对慢性酸反流性食管炎大鼠模型进行上述指标的检测，从而了解姜黄素对炎症的抑制作用，并进一步了解其通过哪条信号通路发生作用，为进一步开发胃食管反流病的治疗新方法提供实验依据。

本项目成功建立了慢性酸反流性食管炎大鼠动物模型，并在此基础上，用不同剂量姜黄素干预后，通过用real-time PCR和western blotting方法检测食管组织炎症介质的释放情况，从而探索姜黄素对慢性酸反流性食管炎的抗炎作用，并明确得出姜黄素对于慢性酸反流性食管炎大鼠炎症介质的释放具有明显的抑制作用。用姜黄素干预后，四种炎症介质IL-6，COX-2，GM-CSF和TNFα的释放明显减少，PKC亚型（βδγεη）在食管黏膜的分布均明显减少，而PKCα和PKCθ则无明显变化。提示姜黄素可能通过PKC信号转导途径发挥其炎症抑制作用。从以上试验过程中也得出姜黄素发挥抗炎作用的最佳剂量为10mg/kg腹腔注射。进一步分别用PKC抑制剂和NF-κB抑制剂进行干预后，手术造模，并分别检测炎症介质释放情况以及PKC亚型分布情况来进一步证实姜黄素的作用机制。.用PKC抑制剂干预以后的结果如下：①炎症介质释放情况，四种炎症介质，IL-6，COX-2，GM-CSF和TNF-α在C组（姜黄素+PKC抑制剂）均高于A组（PKC抑制剂）和B组（姜黄素组），说明将PKC此信号转导途径全部抑制后，姜黄素将无法发挥其抗炎保护作用，间接说明姜黄素是通过PKC信号转导途径起作用。②PKC亚型分布情况，除PKCθ外，其余PKC亚型（αβγεδη）均在C组高于A组和B组，这与BIM对上述PKC亚型具有高度选择性有关，而对PKCθ亚型则不具有抑制作用，与上述结果相符。.用NF-κB抑制剂干预以后的结果如下：①在炎症介质释放方面，四种炎症介质，IL-6，COX-2，GM-CSF和TNF-α在C组（姜黄素+NF-κB抑制剂）均高于A组（NF-κB抑制剂）和B组（姜黄素组），说明将NF-κB抑制剂此信号转导途径抑制后，姜黄素将无法发挥其抗炎保护作用，间接说明姜黄素是通过NF-κB抑制剂信号转导途径起作用。②PKC亚型分布情况，除PKCα，PKCθ，PKCη外，其余PKC亚型（βδγε）均在C组高于A组和B组，说明PKC四种亚型PKCβ，PKCδ，PCKγ，PKCε是通过NFκB信号转导途径起作用，而PKCη则通过NF-κB以外的其他信号途径发挥作用。.综上所述，本项目通过以上结果得出以下结论：①姜黄素可以抑制慢性酸反流性食管炎大鼠食管黏膜中炎症介质的释放。②姜黄素通过PKC-NFκB信号转导途径发挥其抑制作