miR-96参与老年性聋小鼠DBA/2J毛细胞凋亡的机制

老年性聋是引起交流障碍最常见的医学难题，严重影响人们的交往和社会发展。凋亡是老年性聋耳蜗毛细胞死亡的主要形式，我们的前期研究发现通过拮抗凋亡可以有效保护毛细胞从而延缓老年性聋的发生，提示调控毛细胞凋亡是防治老年性聋的有效途径。小RNAs（microRNAs，miRNAs）为近年来发现的一类转录后基因调节因子，对细胞凋亡具有重要调节作用。新近研究证实miR-96与内耳的发育及感音神经聋的发生密切相关，其机制可能与其调控凋亡基因、介导细胞凋亡的发生有关。然而，目前尚无miR-96介入耳蜗毛细胞凋亡的研究，也无有关miR-96在老年性聋发生发展中作用的报道。本研究拟采用DBA/2J老年性聋小鼠，明确miR-96在耳蜗的表达及分布情况，探讨miR-96在老年性聋毛细胞凋亡中的作用，探索miR-96参与毛细胞凋亡的具体机制，为老年性聋的防治提供理论依据。

miR-96 与内耳的发育及感音神经聋的发生密切相关， 是毛细胞发育和功能维持的主要调节小RNA之一，但其具体调控机制以及发挥功能的途径尚不清楚。本研究探讨了miR-96在延缓老年性聋发生中的作用；利用TALEN技术制备了 miR-96及5个miR-96调控相关基因的基因敲除斑马鱼动物模型；对斑马鱼内耳毛细胞与听力发育的关系进行了较为深入的研究；利用miR-96过表达的HEI- -OC1细胞对其调控的靶基因进行了初步探索。结果如下：1.在目前的研究条件下，miR-96对老年性聋有一定的保护作用，但程度有限。 2. 完成了miR-96及5个miR-96调控相关基因 tspear、 kars、clic5b、elmod3、spectrin a2 Talen质粒的构建、鉴定和斑马鱼胚胎注射。其中tspear、clic5b、kars、elmod3已获得F1代突变体，并已获得clic5b-/-、kars-/- F2代。3.斑马鱼听力发育与毛细胞的数量、Ribbon突触的变化以及毛细胞的老化密切相关。4. 发现 6个miR-96 调控的候选靶基因（Slc39a1、Itpr1、Sdc2、Vat1、Ap2b1、Herpud1）。