Slit2介导白细胞定向迁移的分子机制研究

Slit2及其受体Robo1调控神经细胞和轴突，血管内皮细胞及白细胞迁移过程。但是，Slit2介导排斥性迁移（神经细胞和轴突，中性白细胞）和吸引性迁移（内皮细胞）的分子机制尚有待阐明。我们体外和体内动物实验的结果表明，Slit2促进Eotaxin引起的嗜酸性粒细胞趋化，但抑制SDF-1a引起的中性粒细胞趋化。我们发现Naf1a和srGAP1都能结合Robo1胞内区CC3段。非常有趣的是：中性粒细胞高表达srGAP1，可响应Slit2而使Cdc42失活，进而抑制细胞迁移；反之嗜酸性粒细胞低表达srGAP1，Slit2刺激Robo1与Naf1a结合，活化PI3K和Rac1进而促进细胞迁移。我们提出假说，Robo1下游两条不同的信号通路的平衡决定Slit2介导的白细胞定向迁移。我们的工作提示Slit2可能成为调控白细胞定向迁移及体内炎症的潜在分子靶标，为新药物的研究开发提供了线索。

本项目证明了Slit2/Robo1信号对以中性粒细胞浸润为主的急性肺炎模型有抑制作用，而对以嗜酸性粒细胞浸润为主的哮喘模型有促进作用。Slit2在炎症刺激下高表达，其在肺组织中形成的浓度梯度调控了嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的趋化迁移。本项目揭示了Slit2抑制趋化运动（中性白细胞）和促进趋化运动（嗜酸性粒细胞）的分子机制依赖于Slit2-Robo1下游信号分子srGAP1的表达差异及其对两类白细胞中Cdc42与PI3K信号平衡的调节，发现srGAP1是胞内决定Slit2调控方向的中心分子，并确认了Slit2刺激胞内PI3K活化主要通过催化亚基p110-γ，检测了Naf1α及Src激酶在介导Robo1与p85结合中的潜在作用。本项目还利用IP-MS进一步尝试寻找了Robo1结合蛋白中介导p85结合的新分子。同时我们还为下一步的工作构建筛选了基因敲除小鼠及ELISA检测试剂盒等研究工具。本项目阐明了Slit2对两类白细胞趋化运动提供不同调控方式的分子机制，提示了Slit2可能成为调控白细胞定向迁移及体内炎症的潜在分子靶标，为新药物的研究开发提供了线索。在第一部分工作完成的同时，我们还在筛选鉴定白细胞与淋巴细胞发育分化相关一些新基因，其中发现Pcid2参与淋巴细胞的谱系建立及维持干细胞的自我更新。观察到Pcid2及其结合蛋白EID1在干细胞自我更新与分化调控上的重要生理意义，确认了Pcid2对EID1/p300转录调控复合体的作用机制。