氩氦冷冻消融联合GM-CSF诱导原位肿瘤疫苗的相关机制研究

经皮穿刺冷冻消融治疗局限性前列腺癌是目前相关研究领域热点问题之一，但中晚期前列腺癌仍是治疗难点，治疗后残存癌细胞是肿瘤复发、进展的根源，而有效的免疫治疗是清除残存癌细胞重要手段之一。本课题组前期研究发现冷冻消融治疗不但能消灭大量癌细胞，还可诱导抗肿瘤免疫。为进一步阐释冷冻免疫反应相关机制，本研究拟采用免疫组化、流式细胞术、ELISA、ELISPOT、杀伤实验等技术方法，通过体内、体外实验，动态评价冷冻治疗后DC、不同淋巴细胞亚群从肿瘤微环境、引流淋巴结到脾脏、外周血数量、功能变化，分析其时间、空间分布相互联系，在分子水平上分析探讨冷冻消融癌细胞释放HMGB1对免疫反应的影响；并利用GM-CSF扩增DC数量和促进DC成熟的功能，使体内有足够DC从冷冻消融的癌细胞捕捉肿瘤相关抗原，以期增强免疫反应，探讨冷冻联合GM-CSF方法诱导原位肿瘤疫苗的可行性与有效性。为中晚期前列腺癌探索新的治疗方法。

经皮穿刺冷冻消融治疗局限性前列腺癌是目前相关研究领域热点问题之一，但中晚期前列腺癌仍是治疗难点，治疗后残存癌细胞是肿瘤复发、进展的根源，而有效的免疫治疗是清除残存癌细胞重要手段之一。本课题组利用动物实验、细胞学实验，采用免疫组化、流式细胞术、Western Blot、ELISA、ELISPOT、细胞杀伤实验等技术方法，系统探讨冷冻治疗前列腺癌后机体抗肿瘤免疫反应的变化特征，动态评价冷冻治疗前后引流DC、不同淋巴细胞亚群从肿瘤微环境、引流淋巴结到脾脏、外周血数量、功能变化，分析其时间、空间分布相互联系，在分子水平上分析探讨冷冻消融癌细胞释放HMGB1对免疫反应的影响；结果表明（1）冷冻治疗前列腺癌后可提高机体外周血Th1/Th2比值，并刺激肿瘤引流淋巴结CD4+Th细胞、CD8+CTL细胞的肿瘤特异性免疫反应，但持续时间短，并不能诱导脾脏T细胞抗肿瘤免疫反应，不能降低肿瘤肺转移率；（2）冷冻消融治疗术后肿瘤引流淋巴结中DC数量及活化比例有所升高，相关性分析表明引流淋巴结CD4+T细胞、CD8+CTL细胞的肿瘤特异性免疫反应与DC比例及活化具有明显相关性；（3）冷冻消融治疗导致肿瘤细胞坏死释放HMGB1，，HMGB1可通过DC表面TOLL-4受体引起肿瘤局部及脾脏DC数量及活化比例明显增加，诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫反应。（4）冷冻联合GM-CSF治疗可增加引流淋巴结、脾脏DC数量及活化比例；增强肿瘤引流淋巴结T细胞抗肿瘤免疫反应，并诱导脾脏T细胞抗肿瘤免疫反应，延长冷冻免疫反应持续时间，有效降低肺转移发生率，延长荷瘤小鼠的生存期。.该课题完成过程中发表论文11篇，其中SCI论文1篇，中华医学杂志5篇，中华放射学杂志1篇、核心期刊4篇，培养博士研究生1名、硕士研究生4名。相关研究成果获天津市科技进步三等奖1项。