从G蛋白偶联受体GPR48信号通路探讨左归丸对肾虚骨质疏松症的调节机制

According to the TCM theory that the kidney stores the essence, governs bone marrow, based on the prevention and treatment of osteoporosis in clinical practice, in order to ovariectomized osteoporosis caused by ( in vivo ) and osteoblastic cells ( in vitro ) as the research object, using the theory of a combined approach, using the method of RT-PCR and Western blotting, We study the expression of GPR48、ATF4、OCN、BSP、TGF-β1、BMP6/BMP7 mRNA and proteins in the femur，kidney，hypothalamus and osteoblastic cells of the rats of osteoporosis with kidney-deficiency by using ovariectomy.we study the Zuogui Pill on GPRS pathways and bone metabolism related signal adjustment mechanism; and exposing the inner mechanism of the osteoporosis with Kidney-deficiency .

本课题依据中医学"肾藏精，主骨生髓"理论，基于防治骨质疏松症的临床实践，以摘除卵巢所致骨质疏松症（体内实验）和成骨细胞（体外实验）为研究对象，采用方证结合的办法，用RT-PCR法及Western印迹法检测大鼠骨、肾、下丘脑及成骨细胞组织中G蛋白偶联受体GPR48、ATF4、OCN、BSP、TGF-β1、BMP6/7的mRNA和蛋白表达，来探讨左归丸对G蛋白耦联受体信号转导系统及骨代谢相关信号的调节机制影响；进而揭示骨质疏松症的内在机理。

本课题依据中医学“肾藏精，主骨生髓”理论，以摘除卵巢所致骨质疏松症为研究对象，采用方证结合的办法，用ELISA法及Western印迹法检测大鼠骨、肾、下丘脑及成骨细胞组织中G蛋白偶联受体GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5等相关因子的蛋白表达，来探讨左归丸对G蛋白耦联受体信号转导系统及骨代谢相关信号的调节机制影响；进而揭示骨质疏松症的内在机理。结果显示：①采用摘除大鼠双侧卵巢方法可以成功复制骨质疏松症模型。②正常大鼠的骨、肾及下丘脑组织中存在GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5蛋白的表达；在模型组大鼠骨、肾组织中的GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5的蛋白水平表达均有明显下落，而在下丘脑组织中的GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5蛋白水平表达有明显的升高。③大鼠的骨、肾组织中GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5蛋白含量下降，下丘脑组织中GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5的蛋白含量升高，可能是骨质疏松症骨代谢失常的分子生物学机制之一。④左归丸、右归丸组用药12周后，与模型组相比较，都可显著上调大鼠的骨、肾组织中GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5蛋白的表达水平，以及显著下调下丘脑组织中GPR48、ATF4、OT、BSP、BMP6/7、CREB、ATF4、BMP9、Smad1/5蛋白的表达水平。⑤左归丸、右归丸可以通过对GPR48、BSP、OT、ATF4、BMP6的调节作用，可以促进骨髓间充质干细胞向骨细胞的分化。