Chk1参与肝癌Syk(L)和Syk(S)的表达调控及机制研究

在国家自然科学基金项目等资助下，研究发现肝癌Syk基因两种异构体功能相反，Syk(L)具有抑癌基因功能，而Syk(S)具有癌基因功能。文献报道提示Syk(L)特有，而Syk(S)缺失的氨基酸序列中可能存在Chk1磷酸化底物基序；预实验结果提示Chk1抑制剂G?6976作用于肝癌细胞可导致Syk(L)表达增多，而Syk(S)表达减少。基于以上理论基础和研究结果，我们推测Chk1可能参与肝癌Syk(L)和Syk(S)的表达调控。本项目拟采用基因转染、RNA干扰、体外结合实验、免疫共沉淀和定点突变等方法，探讨肝癌细胞中Chk1是否调控Syk两种异构体的表达及其分子机制；通过检测肝癌组织中Chk1与Syk(L)和Syk(S)蛋白的表达，了解Chk1与Syk两种异构体的表达是否存在相关性，以及三者作为肝癌术后复发及预后标志物的意义。本研究结果有助于为肝癌信号转导研究和靶点治疗等提供新的理论依据

全长型的脾酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase, SYK)亦称为SYK(L)，由于在转录过程中的选择性拼接，翻译产生一种在interdomain B功能域上较SYK(L)减少23个氨基酸的异构体蛋白，称之为SYK(S)。已有研究表明SYK两种同质异构体的生物学功能有较大的差异；分析文献资料发现：SYK(L)中特有，而SYK(S)缺失的23个氨基酸中存在Chk1的磷酸化基序 (290ISRIK295SY)，在猪、小鼠、大鼠、人类等不同的种属间具有高度的同源性。在此基础上，本研究主要探讨肝癌细胞中Chk1 是否调控SYK 两种异构体的表达及其分子机制。. 我们的研究结果提示：Chk1可以调节SYK(L)蛋白的表达，而对其异构体SYK(S)蛋白表达无明显影响；Chk1通过磷酸化SYK(L)第295位点的丝氨酸，启动泛素—蛋白酶体途径降解SYK(L)蛋白。生物学功能试验显示：突变子SYK(L)-S295A较其野生型SYK(L)-WT具有更好的抑制肿瘤细胞增殖、克隆形成、侵袭以及肿瘤形成能力。肝癌组织中Chk1高表达，并与患者不良预后相关；162例肝癌组织中Chk1蛋白与SYK(L)蛋白两者表达呈负相关(P < 0.001)。. 因此，肝癌中Chk1可以调控SYK(L)表达，对其异构体SYK(S)无明显影响；肝癌SYK(L)发挥抑癌基因的功能，作为Chk1的磷酸化底物，通过泛素—蛋白酶体途径，SYK(L)蛋白被降解；靶向肝癌Chk1/SYK(L)通路具有潜在的治疗价值。