L型钙离子通道羧基末端对成牙本质细胞多基因转录调控作用

L型钙离子通道是调控成牙本质细胞钙离子摄入的主要跨膜通道。由于其分子结构的特殊性，位于胞内的羧基末端容易发生水解而形成游离的生物活性片段，但迄今为止，这种生物活性片段在成牙本质细胞中的作用尚未见研究报道。本项目在前期研究的基础上，通过制备Cav1.2亚型羧基末端特异性多克隆抗体，免疫荧光染色和western blot观察其在成牙本质细胞内的定位；YFP荧光标记示踪核转位现象；免疫沉淀和蛋白质谱分析研究与其结合的核蛋白种类；荧光素酶报告基因研究其可能的转录调控活性和活性结构域；Microarray芯片杂交观察其调控的成牙本质细胞的基因种类和数量。研究结果将有助于深入了解L型钙离子通道在成牙本质细胞的分化、牙本质形成和损伤修复中的作用，为进一步阐明牙齿发生和发育机理提供有意义的实验依据。

本项目经过系统的研究，主要解决了以下问题：一、首次明确了L型钙离子通道Cav1.2及其羧基末端在SD大鼠牙胚发育过程中具有时空表达特异性，发现Cav1.2羧基末端参与牙胚发育早期的细胞增殖、分化及牙的形态发生，同时与成釉细胞和成牙本质细胞的分化、成熟及功能发挥密切相关。二、发现Cav1.2羧基末端在龋病牙髓组织中和牙髓损伤动物模型中呈现表达差异性，说明Cav1.2羧基末端可能参与成牙本质样细胞的分化形成过程，与修复性牙本质的形成过程有关。三、实验首次明确了在大鼠牙髓干细胞中有L型钙离子通道Cav1.2及其羧基末端的表达，并证实了其在大鼠牙髓干细胞的分化中具有重要作用，且周期性机械应力刺激作用下可以促进Cav1.2及一些骨向和牙向基因的表达。这些研究结果为牙髓损伤修复中牙髓干细胞的研究，以及牙胚的发育过程研究提供了重要的实验依据。在本基金的资助下，已在PLOS ONE杂志发表SCI论文1篇，国内核心期刊发表2篇，国内一般期刊发表1篇，有2篇英文文章完稿待投。