14-3-3ζ 参与出核转运机制调控NF-kB活性影响复发急性髓系白血病细胞生长的分子机理研究

。The relapse acute myeloid leukemia (AML) remains the main troubel of treatment，which needs new strategy. It was found by us that the suppression of 14-3-3ζ by RNA interference resulted in inhibition of the proliferation of AML cells,protein expression of Bcl-2 and Mcl-1,and the activity of NF-κB.It was impllied that 14-3-3ζ was very important for the proliferation of AML.But the mechanism is unknown.Accordingly this project will study the effect of anti-leukemia and anti-apoptosis on NOD/SCID AML model at first.So basing on these findings and the important role of nuclear translational factor NF-κB in survival of AML, this project will detect the expression of Bcl-2 and Mcl-1 in HL-60 with regulated expression of 14-3-3ζ.This project will lay emphasis on studying the acetylation of NF-κB and IκB, especially the regulation of nuclear export of HDAC3 and the role of 14-3-3ζ in the regulation of nuclear export of IκB by nuclear exprot protein CRM1. Meanwhiles the expression of 14-3-3ζ will be detected in bone marrow cells of AML patients to discuss the significance for 14-3-3ζ in clinical prognosis. This project will be hoped to reveal the new mechanism of 14-3-3ζ in relapse AML,provide the important theoretical basis for the novel targets and treatment strategy.

复发急性髓系白血病（AML）一直是临床治疗难题，亟待新策略。我们最近发现下调14-3-3ζ可抑制AML细胞系生长、Bcl-2和Mcl-1的表达及其转录因子NF-κB活性，揭示了14-3-3ζ对AML的重要性，但分子机制不清楚。据此，拟首先采用NOD/SCID小鼠AML模型探讨14-3-3ζ干涉的体内抗白血病作用；鉴于NF-κB在复发AML中的作用至关重要，本课题通过调控14-3-3ζ表达，检测其通过NF-κB对Bcl-2和Mcl-1表达的影响；并着重从NF-κB乙酰化和IκB方面，尤其是14-3-3ζ对HDAC3出核调节，以及其在出核蛋白CRM1的IκB出核转运中的作用，阐明其对NF-κB活性及bcl-2和mcl-1表达调控机制；并探讨病人AML细胞14-3-3ζ表达与预后关系。本课题希冀拓展对14-3-3ζ分子调控机制的认识，发现AML复发新机制，揭示新治疗靶点，具有重要理论和临床意义

复发急性髓系白血病（AML）一直是临床治疗难题，亟待新策略。本课题进一步研究发现下调14-3-3ζ可抑制AML细胞系生长、细胞抗凋亡分子（Bcl-2和Mcl-1蛋白）的表达及其转录因子NF-κB活性，进一步明确了14-3-3ζ是通过调控抗凋亡相关分子来参与AML细胞生长调控的。而且siRNA14-3-3ζ下调14-3-3ζ能降低NF-ĸB的活性，但与乙酰化水平及IκBα基因表达无关，提示14-3-3ζ 对NF-κB p65活化存在其他机制。由于最新研究提示lncRNA参与肿瘤的发生发展，可能是新的诊治靶点，我们先建立稳定高表达14-3-3ζ慢病毒干涉载体的HL-60或HL-60/VCR细胞体系，通过RNA-Seq测序方法检测HL-60或HL-60/VCR细胞体系14-3-3ζ慢病毒干涉前后表达谱变化，干涉后HL-60和HL-60/VCR细胞分别有10个ncRNA上调，29个和58个ncRNA下调；并发现新的lncRNA。而具体参与14-3-3ζ对AML细胞凋亡分子调控的机理研究仍在进行中。另外，通过检测14-3-3ζ基因在成人AML患者中的mRNA表达水平，初步探讨其与AML患者临床特征和治疗反应的相关性。结果显示AML患者的细胞内14-3-3ζ转录水平显著高于正常人，并在治疗达到完全缓解（CR）后表达下降，在巩固期持续低表达，2例复发时则再次升高。总之，本课题目前结果，迄今国际上首次阐明了14-3-3ζ通过调控抗凋亡相关分子参与AML细胞耐药和药物敏感性的调控，从lncRNA新角度来深入探讨机制,有多个已知和新的lncRNA在其中起着重要的作用，这一结果尚未见报道。临床研究初步揭示14-3-3ζ mRNA水平表达是临床预后相关不良因素。本课题拓展了14-3-3ζ在AML发生发展中机制的新认识，发现了潜在的新的诊治靶点，具有重要的理论和临床意义。