大菱鲆母源抗体蛋白及其mRNA在卵子发育过程中的富集规律以及在胚胎中传递、表达特征研究

存在于卵子中的母源抗体蛋白是鱼类自身免疫保护的重要物质基础。目前研究表明，母源抗体可以通过蛋白传递或mRNA 传递而后表达的两种方式积累到卵子中。针对鱼类卵子发育过程中抗体蛋白及其mRNA的富集规律、以及两者在胚胎发育过程中的传递、表达特征进行研究，对于深刻揭示鱼类母源免疫保护机制具有重要意义。然而目相关研究十分有限。本项目选取大菱鲆关键发育期卵巢和胚胎，对其抗体蛋白及其mRNA水平进行检测，以反映其动态变化规律，同时对胚胎中抗体蛋白理化性质、免疫原性等进行分析，以揭示抗体蛋白的不同来源。项目还设置亲鱼免疫加强组，研究母体免疫加强对抗体蛋白及其mRNA富集规律的影响。研究中涉及亲鱼免疫，酶联免疫吸附（ELISA）、RT-PCR定量分析、蛋白纯化、色谱分析等相应检测分析方法。研究成果立足阐释胚胎中抗体蛋白的积累过程和产生方式，是对鱼类母源免疫机制的深入探索，也是推进其理论应用的重要环节。

本项目选取大菱鲆关键发育期卵子和胚胎，对其抗体蛋白及其mRNA水平进行检测，以反映其动态变化规律。研究结果表明，通过免疫增强，大菱鲆卵子及早期胚胎内的抗体IgM蛋白水平及其mRNA水平都获得了显著提高，抗体IgM蛋白水平随胚胎发育呈逐步降低规律，且在特定发育期后免疫后代与非免疫后代差异消失。IgMmRNA水平呈现先增高后降低趋势，体现了IgMmRNA的母源传递性以及子代自身IgMmRNA产生及富集表达规律。同时对胚胎中抗体蛋白理化性质、免疫原性等进行分析，揭示了卵子中抗体蛋白与亲鱼血清中抗体蛋白的同源性。在本项目执行中，我们还对免疫后代的卵子与非免疫的卵子进行了攻毒实验，实验结果表明，免疫亲鱼产生的卵子攻毒后的孵化率显著高于对于对照组，在对仔鱼攻毒实验中未发现差异。项目在实施过程中，建立了卵子抗体蛋白IgM酶联免疫吸附（ELISA）方法、IgM mRNA RT-PCR定量分析方法、同时建立的卵子、胚胎攻毒优化条件。以上结果的获得加深了对遗传基因水平母源保护过程的认识，为母源免疫调控提供参考依据，研究结果是对鱼类母源免疫机制的深入探索，也是推进其理论应用的重要环节。在本项目支持下发表核心论文1篇（录用）、撰写SCI论文一篇，并申请国家发明专利一项。培养博士研究生1名。