化瘀通络灸法治疗血管性痴呆的促血管生成机制研究

选用Wistar大鼠，双侧颈总动脉反复缺血-再灌注结合腹腔注射硝普钠法制备血管性痴呆模型，化瘀通络灸法，选百会、大椎、神庭穴治疗后，采集并制备动物血清，采用体外研究的方法，在人脐静脉内皮细胞株ECV304上，对照研究灸疗后血清效应物质干预ECV304培养过程，MTT法观察细胞增殖，细胞划痕实验检测细胞的迁移，管形形成实验检测细胞ECV304分化，Western blot法检测ECV304表达 VEGF、bFGF蛋白水平，以探讨化瘀通络灸法在"血管生成"的关键过程中的作用；同时在体研究运用RT-PCR方法检测灸疗后动物脑内学习记忆要害部位（皮层、海马）VEGF及其受体Flt-1、Flk-1的表达，并与空白对照组、西药治疗组对照，研究化瘀通络灸法对"血管生成"的关键物质的影响，分析化瘀通络灸法治疗血管性痴呆的促"血管生成"的作用机制和作用途径，为临床灸治血管性痴呆提供理论和实验依据。

目的：化瘀通络灸法治疗血管性痴呆模型大鼠，通过检查大鼠学习记忆成绩、神经行为学评分验证临床疗效；体内观察大鼠海马内VEGF、flt-1、bFGF和bFGF-r的表达水平，结合体外艾灸效应血清的干预血管内皮细胞增值、迁移的变化，探讨化瘀通络灸法治疗血管性痴呆的促血管生成机制，为针灸临床治疗血管性痴呆提供理论依据。方法: 选取Wistar雄性老年大鼠，4-血管阻断法制备大鼠血管性痴呆模型，电脑随机数字表法随机分为三组：艾灸组、西药组、模型组，并设假模型组对照。艾灸组取百会、大椎、神庭穴艾灸治疗，西药组茴拉西坦灌胃共2个疗程。神经行为学评分并结合跳台仪检测治疗前、第2疗程后学习记忆成绩；免疫组化检测各组大鼠海马VEGF、bFGF及其受体flt-1、bFGF-r的表达；疗程结束后大鼠眼眶取血，制备血清，干预人脐静脉内皮细胞（HUVEC-12）培养过程，与模型组和假模型组血清干预组对照，四甲基唑盐比色法（MTT法） 检测内皮细胞的增殖，细胞划痕法检测细胞的迁移，观察其对血管内皮细胞增殖、迁移的影响。结果： 经2个疗程治疗后，动物跳台实验的潜伏期、错误次数，以及神经行为学评分，艾灸组、西药组与模型组均有非常显著性差异，艾灸组与西药组相比也有显著性差异。表明艾灸、西药在提高VaD大鼠潜伏期，降低VaD大鼠错误次数以及对神经行为学评分影响均有非常显著性疗效，而艾灸组明显优于西药组。艾灸组、西药组与模型组海马内表达VEGF、flt-1、bFGF、bFGF–r的灰度值有显著性差异，VEGF、flt-1指标艾灸组与西药组相比也有显著性差异。体外研究MTT法检测结果显示，与假造模比较，模型组、艾灸组大鼠血清干预HUVEC-12增殖均较明显，且艾灸组优于模型组；细胞划痕法检测结果显示，，艾灸组细胞迁移率均高于与假造模模型组。结论:艾灸在改善VaD大鼠行为学评分及提高记忆成绩均有确切疗效，其作用机制可能存在着艾灸调控VaD大鼠海马内VEGF、flt-1、bFGF和bFGF-r的表达水平，特别是上调关键因子 VEGF、flt-1表达，同时增强血管内皮细胞增殖、提高迁移率，进而促进了要害部位的血管生成，并最终激发了脑内神经的损伤修复机制。