ET-1/ETAR通路上调功能性CXCR4基因表达而促进鼻咽癌转移的机制研究

ET-1/ETAR及SDF-1/CXCR4是与鼻咽癌转移密切相关的两条G蛋白偶联通路。课题组发现 ET-1/ETAR通过与SDF-1/CXCR4的信息交流而调控鼻咽癌转移的新机制，但在转录水平的信息交流机制尚不清楚。生物信息学分析显示CXCR4启动子具有NFκB、HIF-1α和 Ets1的识别位点。预实验发现抑制NFκB能下调ET-1对CXCR4的表达，而ET-1亦能上调常氧鼻咽癌细胞的HIF-1α。本课题在前期研究基础上，拟利用基因重组、报告基因检测、EMSA、ChIP等技术探测ET-1介导的调控CXCR4表达的关键顺式作用元件及相关的转录因子，组织芯片检测鼻咽癌组织相关转录因子与CXCR4表达的关系及其对预后的影响，观察转录因子抑制剂及RNA干扰阻断相关转录因子对ET-1介导的CXCR4表达及侵袭能力的影响，揭示ET-1对鼻咽癌CXCR4的转录调控机制，为防治鼻咽癌转移提供新的靶点。

ET-1/ETAR及SDF-1/CXCR4是与鼻咽癌转移密切相关的两条G蛋白偶联通路。课题组发现 ET-1/ETAR通过与SDF-1/CXCR4的信息交流而调控鼻咽癌转移的新机制，但在转录水平的信息交流机制尚不清楚。生物信息学分析显示CXCR4启动子具有NFκB、HIF-1α和 Ets1的识别位点。研究发现：（1）通过成功克隆了CXCR4启动子，构建一系列NF-κB、HIF-1α及Ets1结合位点的荧光素酶报告基因表达载体，双荧光素酶检测、染色质免疫共沉淀、RNA干扰明确了ET-1/ETAR通路介导的鼻咽癌细胞CXCR4启动子转录因子结合位点为ETS-1。Real-time PCR显示ET-1可以上调鼻咽癌细胞ETS-1mRNA表达。研究发现了ET-1/ETAR通过转录因子ETS-1介导上调CXCR4促进鼻咽癌转移的转录机制，为ETS-1作为鼻咽癌转移干预的潜在靶点提供证据。（2）进一步阐明ET-1/ETAR通过激活MAPK/ERK及PI3K/AKT信号通路上调功能性CXCR4表达促进鼻咽癌转移的新机制，ETAR通过增强有功能的CXCR4表达来促进鼻咽癌细胞的迁移，发现鼻咽癌组织中ETAR与CXCR4的表达水平显著正相关并与患者的远处转移密切相关，确立了ET-1/ETAR为鼻咽癌转移的潜在干预靶点。（3）率先对ET-1及ETAR基因（EDNRA）多态性与局部晚期鼻咽癌患者的预后关系及功能进行研究，首次发现携带EDNRA/H323H TC/CC基因型的5年总生存率明显低于野生型TT基因型的患者，多因素分析显示EDNRA/H323H SNPs是影响局部晚期鼻咽癌患者转移及总生存的独立预后因素，细胞功能研究显示EDNRA/H323H SNPs位点突变的细胞株在外源性ET-1刺激下增殖明显较野生型快，为鼻咽癌的转移及预后判断提供新的遗传学指标。上述研究证实了ET-1/ETAR在鼻咽癌进展及转移的重要作用，并阐明其上调CXCR4促进转移的信号通路和转录机制，为鼻咽癌的预后判断及转移干预提供新靶点。