TRAF4调控慢性放射性小肠炎肠壁纤维化的作用及分子机制

近年来因盆腔肿瘤接受放疗的患者逐渐增多，慢性放射性小肠炎（CRE）的发病率居高不下,引起肠梗阻、穿孔及瘘等并发症严重影响预后。其主要病理改变为肠壁纤维化，已有研究表明TGFβ1/Smad3和RhoA/ROCK信号通路过表达参与CRE肠壁纤维化。肿瘤坏死因子受体相关因子4（TRAF4）是体内筛选出调控放射性损伤的相关基因（nature，2009），TRAF4能调控TGFβ及乳房上皮细胞表达，其参与CRE的具体机制远未清楚。本项目通过动物建模、细胞培养、RT-PCR、蛋白质印迹、特殊染色等方法，研究TRAF4对上述信号通路的可能调控作用及可能存在的信号通路之间的交叉以期阐明TRAF4与CRE肠壁纤维化的关系，这不仅可为CRE的发病机制提供新的视点，同时对CRE药物的研发具有指导意义。

放疗在盆腔肿瘤治疗中具有重要作用，但慢性放射性小肠炎的发病率仍居高不下，相关的并发症严重影响患者的生活质量，临床上缺乏有效的治疗手段，其发病机制目前尚不明确。通过对可能参与疾病过程上游基因的验证、并对其信号通路的探讨，为其发病机制及治疗干预靶点提供可能。本项目根据手术方式、放射剂量进行分组，发现低剂量（8Gy）的干预条件能成功建立稳定的大鼠慢性放射性小肠炎的模型，存活时间超过半年，为后续研究提供较好的基础。TRAF4是体内筛选出参与调控放射性损伤的基因，RT-PCR及蛋白电泳均证实放射性损伤组大鼠TRAF4的表达量明显高于对照组，且放射组TGFβ1、Smad3表达量显著高于对照组。放射组RhoA与ROCK的表达量与对照组无显著差异。将人小肠上皮细胞进行培养，分为对照组、放射组、放射+smad3抑制组及放射+TRAF4过表达组。RT-PCR结果如下：CTGF：TRAF4过表达组表达量明显高于其它组，而samd3抑制组其表达量低于放射组。Smad3：放射组表达量明显高于对照组，TRAF4过表达组高于放射组。RhoA：放射组表达量高于对照组，Smad3抑制组明显低于其它放射组， TRAF4过表达组高于放射组。细胞实验表明TRAF4可能通过上调TGFβ1/Smad3和RhoA/ROCK通路参与小肠细胞放射性损伤过程，并且smad3可能通过上调RhoA/ROCK通路表达促进纤维化的进展。体内实验结果显示TRAF4过表达与小肠慢性放射性损伤相关，可能通过上调TGFβ1/Smad3通路参与过程，而RhoA/ROCK通路相关性小。其为CRE的发病机制提供新的视点，对治疗药物的研发具有一定的指导意义。