基于miR-584调控的内质网应激-细胞自噬途径探讨安胃汤干预胃黏膜肠上皮化生机制研究

Though combining the intersection analysis of miR-584 predicted target genes, network pharmacology analysis of An-Wei Decoction (AWD), and previous research, we speculate that it is important of speculate miR-584 regulated endoplasmic reticulum stress-autophagy pathway in AWD intervenes in gastric mucosal intestinal metaplasia. Based on the above theoretical basis, to explore the molecular mechanism of AWD intervention on Gastric mucosa intestinal metaplasia at animal level, the Gastric mucosa intestinal metaplasia model of SD rats will be prepared, the gastric antrum, gastric mucosal and muscular tissues of rats after intervention of AWD were taken and pharmacodynamic index, endoplasmic reticulum stress markers, autophagy and apoptosis, and the expression of miR-584 will be determined. Then, GES-1 epithelial cells will be used for primary cell culture in vitro. And the AWD containing serum is prepared to intervene gastric mucosal cells, and Atagomir-584/Agomir-584 transfection technique is used to reduce expression/overexpression of miR-584 and cell migration ER stress markers, autophagy and apoptosis were determined. This study provides evidence for AWD modern pharmacological research and is of great significance for guiding clinical practice and further development of drugs.

对安胃汤（AWD）网络药理学疾病靶点和miR-584靶基因的交集分析发现MAPK和HSPA5是共同作用蛋白,这两个蛋白同时是miR-58调控胃黏膜上皮细胞化生（IM）的关键蛋白｡基于以上发现提出假说:AWD干预胃黏膜肠IM通过miR-584调控的内质网应激-细胞自噬途径来发挥作用｡本研究制备大鼠的胃黏膜IM模型,给于AWD干预后检测组织中miR-584的表达及内质网应激､自噬及凋亡的情况,再采用Atagomir方法减低miR-584表达进行对比；从动物活体水平探讨AWD干预胃黏膜IM机制｡然后用鹅去氧胆酸干预GES-1细胞制备IM模型,用AWD原药及含药血清进行干预,然后采用Atagomir-584/Agomir-584减低/过表达miR-584,进一步观察内质网应激-细胞自噬的情况及相关的靶基因､通路等｡本研究为AWD现代药理学研究提供证据,对指导临床实践及进一步的药物研发具有重要意义｡

项目背景：胃黏膜肠上皮化生（GIM）过程中存在自噬机制，内质网应激是诱导自噬的途径。本课题组前期发现安胃汤（AWD）有效治疗胃黏膜腺体萎缩、肠上皮化生以及异型增生，但其作用靶点和通路尚不清楚。主要研究内容：通过网络药理学疾病靶点和miR-584靶基因的交集分析发现MAPK和HSPA5（GRP78）是共同作用蛋白，通过构建GIM疾病模型，给予安胃汤干预。采用分子生物学实验，通过检测分析肠上皮化生、内质网应激、细胞自噬凋亡等标志指标，阐明miR-584调控的内质网应激-细胞自噬途径作用机制｡重要结果：动物实验发现安胃汤可明显改善胃黏膜病理变化；减低肠上皮细胞的特异因子MUC2、VILLIN、CDX2、KLF4、SOX2蛋白表达；增强ERS及自噬相关因子PEPK、ATF6、CHOP、Caspase12及LC3-Ⅱ、 Beclin1 mRNA及蛋白的表达；促进自噬小体形成和细胞凋亡。体外实验结果发现安胃汤可明显抑制CDCA诱导的 GES-1构建的GIM模型细胞增殖，影响细胞周期和促进细胞凋亡；促进内质网 ATF6 的激活；抑制miR-584的表达，可增强内质网应激及自噬相关GRP78、LC3Ⅱ及 Beclin1 mRNA及蛋白的表达。动物实验与体外实验结果都显示随安胃汤浓度的增加而作用增强，呈剂量依赖方式。研究结果提示安胃汤可有效抑制GIM的进一步发展，其作用机制可能与激活内质网应激反应，诱导细胞自噬，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，提高相关蛋白和基因表达有关。科学意义：通过构建胃黏膜肠上皮化生模型，验证了安胃汤在GIM中的保护作用，有效抑制GIM的进一步发展，为其的临床应用提供了理论依据。基于分子生物学实验通过构建GIM细胞模型，初步揭示了安胃汤对GIM的作用机制,其机制可能与其通过miR-584调控内质网应激-细胞自噬途径有关的调节有关，能为安胃汤在治疗胃黏膜肠上皮化生的机制提供可靠的证据。