SiRNA下调软骨细胞leptin受体表达抑制骨关节炎关节软骨破坏研究

肥胖是导致OA发生发展的一大因素。脂肪组织可分泌包括leptin在内的一系列因子，后者在OA的病变中起分解代谢作用。基于体内多种组织均可表达leptin，因此仅转染软骨细胞干扰leptin基因虽可下调了leptin表达，但不足以完全阻止其对关节软骨的影响。Leptin的生物活性是通过特异性Leptin受体（Ob-R）来介导。由此设想通过抑制关节软骨细胞上Ob-R表达可能更彻底的抑制OA关节leptin对关节软骨的损害。本研究拟用Ob-Rb-siRNA脂质体包裹体外转染OA患者关节软骨细胞抑制关节软骨细胞上Ob-Rb表达，并从基因和蛋白水平检测Ob-Rb抑制后leptin介导的OA相关前炎性因子表达水平，同时建立兔膝关节骨关节炎模型，通过体内Ob-Rb-siRNA脂质体转染膝关节软骨细胞，验证其对兔膝关节炎关节软骨的保护作用和炎性细胞因子下调情况，为临床OA的基因治疗奠定实验基础。

肥胖是导致OA发生发展的一大因素。脂肪组织可分泌包括leptin在内的一系列因子，后者在骨关节炎（osteoarthritis，OA）的病变中起分解代谢作用。基于体内多种组织均可表达leptin，因此仅转染软骨细胞leptin基因虽可下调了leptin表达，但不足以完全阻止其对关节软骨的影响。Leptin的生物活性是通过特异性leptin受体（Ob-R）来介导。我们通过siRNA技术沉默人OA关节软骨细胞上Ob-R表达，成功下调了人OA软骨细胞中Ob-R的表达，并检测到OA软骨细胞所分泌的前炎性因子MMP-1、IFN-G、IL-1β、NO的mRNA的表达量均明显下降，collagen II的蛋白水平明显升高。同时，我们通过设计合成构建的慢病毒Ob-Rb siRNA，对大鼠的关节软骨细胞进行转染，检测其介导的前炎性因子ADAMTs-5、MMP-1、IL-6、COX-2以及FGF-2的mRNA及蛋白的表达明显下降。大鼠OA模型的体内实验显示，关节液中TNF-α和IL-1β变化均明显降低，软骨组织病理切片染色显示软骨退变较对照组有所延缓。这些结果表明运用RNA干扰技术抑制leptin受体可有效下调OA关节软骨细胞炎性细胞因子的表达，延缓OA关节软骨的退变。