绿茶茶多酚EGCG对肝细胞核受体RXRα/FXRα转录活性的影响及分子机制

Tea is one of the healthiest beverages. The main component of green tea, EGCG, has many biological activities. Our previous studies showed that EGCG could inhibit the mRNA synthesis of hepatitis B virus (HBV). In order to further clarify the molecular mechanisms, based on our recent research progress, we choose the liver nuclear receptor RXRa and FXRa as the objects of study, which play important roles in the transcriptional regulation of HBV genome. The recombinant baculovirus ( Ac-egfp-1.3HBV ) transduction system will be used as a model,whose genome had been inserted with 1.3 times of HBV genome and reporter gene. The methods include the localization of the mutation, plasmid transfection, DARTS, Western blot, spectral analysis. The aim is to identify and analyze the targets of EGCG. The research results not only help to reveal the molecular mechanisms of the natural active ingredients and liver disease, but also contribute to find new therapeutic targets. This project would provide theoretical basis and data for the research and discovery of new health foods and novel food additives. At the same time, the data could enrich basic theories of natural product chemistry and food nutriology and explore new idea or method for liver diseases.

茶叶是全球最普及的健康饮品，绿茶的主要茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）具有多种生物学活性。本课题组的前期研究结果显示EGCG能抑制乙型肝炎病毒（HBV） mRNA的合成，但其分子机制并不清楚，依据课题组近期取得的相关进展，以对HBV基因转录起重要调控作用的肝细胞核受体RXRa和FXRα为对象，以带有1.3倍HBV基因组和报告基因的重组杆状病毒（Ac-egfp-1.3HBV）及其所组成的转导系统为模型，采用定位突变、质粒转染及体外分析等手段，利用DARTS、Western blot、光谱分析等方法，鉴定并解析EGCG的作用靶标。研究结果不仅有助于揭示天然活性成分抗病毒作用的分子机制，鉴定肝病治疗的新靶点，而且为保健食品及新型食品添加剂的研发提供理论和数据支持，同时也可丰富天然产物化学和食品营养学的基本理论，为肝脏疾病的防治探索新理论和新方法。

绿茶是世界排名第一的健康饮品，茶叶中的茶多酚具有多种生物学活性。本课题组的前期研究结果显示绿茶茶多酚EGCG能抑制乙型肝炎病毒（HBV）mRNA 的合成，但其分子机制并不清楚，课题组根据所取得的相关进展，以影响HBV基因组DNA转录的核受体RXRα和FXRα为对象，以肝细胞体转导HBV为体外研究模型，用定点突变、ABPA亲和层析、质粒转染、DARTS、荧光扫描等多种分析方法，从蛋白分子的角度解析并鉴定EGCG抗HBV的分子机制。. 项目的主要研究内容有（1）核受体RXRα和FXRα蛋白与EGCG 结合的鉴定及结合后对 HBV 核心启动子的影响；（2）EGCG 与蛋白结合特性的理化分析；（3）相互结合关键区域的确定。. 通过三年的研究取得如下重要结果：（1）证明了EGCG在细胞内外均可与FXRα特异性结合；并鉴定了二者相互作用的关键位点在FXRα的配体结合区，结合后明显抑制HBV 启动子的转录，从而明确了EGCG 抑制HBV DNA转录的分子机制是EGCG与受体结合特异性结合导致转录激活作用的下调。（2）建立并完善基于肝细胞核受体蛋白RXRα和FXRα的抗HBV 药物研究平台，采用ABPA亲和层析、质粒转染、DARTS、荧光扫描等多种相结合手段，为从天然食品中筛选新型活性物质和新靶标鉴定奠定提供平台，奠定基础。（3）已发表相关研究论文2篇，，另有1篇已被SCI 收录杂志接收，将于7月份发表，目前有中文文章1篇、英文文章2篇已投稿并在审稿中。（4）课题组已形成一个稳定的、多学科交叉的、青年科技骨干为主的科研梯队，2名研究生已完成学业，在读生2 名。. 项目研究中获得的关键数据：（1）EGCG与FXRα是1︰1特异性结合与其配体结合区；（2）低浓度的EGCG即可抑制50%的HBV启动子转录活性；（3）FXRα蛋白结构中参与EGCG结合的氨基酸主要是Cys。. 本项目的研究结果对于从食品成分中筛选并研究天然无毒、低毒的抗病毒因子显得尤为重要，对新靶标的探索及乙肝预防和治疗具有十分重要的科学意义和应用价值。为进一步阐明EGCG 对人体健康的生理作用提供理论依据。