基于p62介导的Nrf2/ARE信号通路与细胞自噬研究温运清利法调控NASH大鼠的作用机制

Recent studies funded by Innovative Research Team（No.2011-CXTD-24）discovered that Qingli as a therapy of Yinchenhao Decoction can regulate the rats’ lipid dysmetabolism induced by high fat diet, enhance the antioxidant ability, inhibit lipid peroxidation; Wenyun as a therapy of Linggui Zhugan decoction can eliminate the hepatic lipid deposition in rats, improve lipid metabolism, but the specific mechanism of Wenyun Qingli therapy is still not clear. We use universally acknowledged rat models to study the regulatory mechanism of p62 mediated Nrf2/ARE signaling pathway and cell autophagy in NASH rats treated by Wenyun Qingli therapy. We take a lead research on regulatory mechanism on the expression of p62, Keap1, Nrf2, SOD, GSH-PX, HO-1, NQO1 in Nrf2/ARE signaling pathway and LC3-II, ATG12-ATG5 in cell autophagy simultaneously; Meanwhile, we compare the curative effect of Linggui Zhugan Decoction, Yinchenhao Decoction combined prescription and positive drug sulforaphane in treatment of NASH,which would confirm the similarities and differences in the regulation of Nrf2/ARE signaling pathway and cell autophagy by Wenyun Qingli therapy, clarify the acting targets by Wenyun Qingli therapy, uncover regulatory mechanism of Wenyun Qingli therapy, make a great contribution to clinical using of Wenyun Qingli therapy eventually.

在校级创新团队项目（No.2011-CXTD-24）的研究中发现：清利为法的茵陈蒿汤能够调节高脂饮食诱导的大鼠脂质代谢紊乱，增强抗氧化能力，抑制脂质过氧化反应；温运为法的苓桂术甘汤能够消除大鼠肝脏脂质沉积，改善脂质代谢，但温运清利法的具体作用机制尚不清楚。本课题组采用高脂饮食法建立NASH大鼠模型，率先进行温运清利法对NASH大鼠p62介导的Nrf2/ARE信号通路与细胞自噬的调控机制研究；首次对NASH大鼠Nrf2/ARE信号通路中p62、Keap1、Nrf2、SOD、GSH-PX、HO-1、NQO1以及自噬相关LC3-II、ATG12-ATG5进行同时研究；比较苓桂术甘汤、茵陈蒿汤及合方与阳性药莱菔硫烷治疗NASH的疗效差异，明确在调控Nrf2/ARE信号通路与细胞自噬作用的异同，阐明温运清利法的作用靶点，揭示温运清利法对NASH大鼠的调控机制，为温运清利法的临床应用提供科学依据。

非酒精性脂肪性肝炎的病因及发病机制仍尚未阐明，也缺乏有效的治疗手段。我们前期研究已经证实，茵陈苓桂术甘汤能显著改善高脂饲料诱导的NASH大鼠的血脂、肝功水平，但是具体的作用机制尚不清楚。.本次研究从调控Nrf2/ARE信号通路与细胞自噬入手，研究茵陈苓桂术甘汤防治非酒精性脂肪性肝炎的作用机理，前者的进一步激活具有清除肝细胞氧化自由基的作用，后者通过代偿性的分解脂滴并清除受损的细胞器以维持肝脏细胞的正常功能，在一定程度上与“温运”与“清利”相互印证，阐明茵陈苓桂术甘汤防治非酒精性脂肪性肝炎的作用机理。用中医理论指导现代分子生物学机制研究，以寻求对非酒精性脂肪性肝炎中医药研究的突破。.本实验研究结果表明：茵陈苓桂术甘汤无论在NASH的预防与治疗中都能起到一定的作用，并且茵陈苓桂术甘汤作为两个经方的有机结合，与单方应用相比较而言，其有进一步降低肝酶水平，并改善血脂水平的趋势，其作用与西药相比疗效基本相当。从作用机制方面而言，茵陈苓桂术甘汤可以过表达Nrf2/ARE信号通路并激活细胞自噬，改善氧化/过氧化的平衡，从而达到改善NASH的目的；在与单方比较方面，茵陈苓桂术甘汤对于Nrf2/ARE信号通路过表达的作用更为明显，而苓桂术甘汤也有这样的作用，两者比较无统计学差异；而茵陈蒿汤并未表现出此作用，而对于细胞自噬的激活而言，合方与单方并未体现出明显差异；这为茵陈苓桂术甘汤的进一步研究提供重要参考。