同源模建HSV2免疫保护及免疫逃避蛋白的多表位融合疫苗

Human herpes simplex virus type 2 (HSV2) infections can cause genital tract herpes, stillbirth, cervical cancer, and no HSV2 vaccine is available. HSV2 can escape from immune clearance of the human body, and form the latent infections. Recent studies proved that HSV2 gC, gE, gH, gI proteins are related to immune escape. This study is to screen B and T cell epitopes from 12 proteins of HSV2 by software analysis, including protective antigens gD, gB and immune escape related proteins gC, gE, gH, gI. The selected epitopes will be inserted into the extracellular fragment of HSV2 gD protein and displayed on the surface for constructing multi-epitope candidate vaccines. The multi-epitope candidate vaccines are produced by using genetic engineering. The immunity of the multi-epitope candidate vaccines will be vertified by animal immune tests.

人类单纯疱疹病毒2型（HSV2）感染可致生殖道疱疹、死胎、宫颈癌，目前没有疫苗。疫苗难以研制的原因是HSV2病毒可以逃避人体的免疫清除，形成潜伏感染。已有研究证实HSV2的膜蛋白gB 、gD是最强的免疫保护性抗原，新近的研究证明HSV2的gC、gE、gH、gI蛋白与免疫逃避相关，这些蛋白通过多种途径干扰机体对HSV2病毒的清除。本研究从HSV2的保护性抗原gD、gB及免疫逃避相关蛋白gC、gE、gH、gI等12个蛋白，筛选B和T细胞抗原表位。利用同源模建技术，以免疫原性最强的HSV2 gD蛋白胞外区为模板，用上述筛选的表位替代非抗原部分，选择上述表位呈现在表面、并基本保持gD蛋白自然构型的融合蛋白为候选疫苗，利用基因工程制备。在细胞和动物水平上评价其体液和细胞免疫水平。

人类单纯疱疹病毒2 型（HSV2）感染可致生殖道疱疹、死胎、宫颈癌，目前没有疫苗。疫苗难以研制的原因是HSV2 病毒可以逃避人体的免疫清除，形成潜伏感染。已有研究证实HSV2 的膜蛋白gB、gD 是最强的免疫保护性抗原，新近的研究证明HSV2 的gC、gE、gH、gI 蛋白与免疫逃避相关，这些蛋白通过多种途径干扰机体对HSV2 病毒的清除。. 本研究首先应用DNAstar, Biosun, Antheprot等软件从HSV2 的保护性抗原gD、gB 及免疫逃避相关蛋白gC、gE、gG、gI 等糖蛋白中预测了16个B细胞候选表位。化学合成这些表位肽并与载体蛋白偶联后免疫小鼠，免疫印迹实验显示上述肽免疫的抗血清与其所属糖蛋白反应强烈，在ELISA实验中表位肽也与其所属糖蛋白的抗体反应强烈，说明这些表位肽具有较强的体液免疫原性。5个B细胞表位肽（gB2466- 473，gC2216- 223，gE2483-491，gG2572-579，gI2286-295）的抗血清在体外能中和HSV-2的感染性，该结果是首次发现，目前为止相关论文中还没有报道。这些结果表明，通过软件计算筛选和实验证实的B，C，D，E，G，I的免疫优势表位可以用于HSV-2病毒诊断和疫苗设计。. 之后利用同源模建技术，以免疫原性最强的HSV2 gD 蛋白胞外区为模板，用上述筛选的表位外加其它7个B/T细胞表位（gD6-18、 gD21-28、gB162-177、gD205-224、gD245-259、gD10-20和gD268-276）插入到gD的胞外区（氨基酸1-290位）取代一些非表位的氨基酸序列，构建多表位的集合肽（MEAPs）。使用三维软件计算预测多表位集合肽的各个表位的独立性，选择上述表位呈现在表面并基本保持gD 蛋白自然构型的融合蛋白为候选疫苗，利用基因工程制备该融合蛋白并纯化。动物实验评价纯化后的MEAP的体液、细胞免疫原性以及抗HSV-2感染的免疫保护效果。结果发现MEAP有较好的体液和细胞免疫原性，能诱导小鼠产生高滴度的中和抗体和细胞因子分泌，MEAP能够完全保护小鼠免受HSV-2感染，这说明它是一个很有希望的HSV-2候选疫苗。. 综上，本课题成功构建了多表位集合肽，该集合肽具有良好的保护性，是HSV-2的候选疫苗。本课题为HSV-2疫苗研制提供了基础。