维甲酸上调肺癌细胞中miRNA let7a表达的调控机制研究

MicroRNA在肿瘤中起重要作用。研究报道miRNA let7a2下调见于肺癌并且预后较差，但其在肺癌细胞中的调控机制尚未报道。我们在研究let7a2转录调控时首次发现维甲酸可上调let7a2在肺癌细胞中表达，本课题拟进一步探讨维甲酸调控let7a2表达的机制及其作用机理，（1）克隆let7a2启动子，构建其报道基因载体,通过报道基因检测、启动子活性分析、综合突变分析、EMSA、CHIP、实时PCR等，探讨维甲酸上调let7a2表达的机制。（2）构建let7a2表达载体，转染肺癌细胞，或维甲酸处理细胞，基因芯片比较检测let7a2或维甲酸对肺癌细胞系基因表达谱的影响，采用实时PCR、Western Blot等，检测维甲酸上调let7a2对相关基因的表达影响。（3）收集临床肺癌标本，检测维甲酸受体、let7a2及相关基因的表达。为进一步研究维甲酸上调let7a2在肺癌中的作用奠定基础

MicroRNA在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。研究报道miRNA let7a2下调见于肺癌并且预后较差，但其在肺癌细胞中的调控机制尚未报道。我们在研究miRNA let7a2转录调控时首次发现维甲酸可上调miRNA let7a2在肺癌细胞中的表达，本课题应用报告基因检测、综合突变分析、EMSA、CHIP、实时PCR等研究手段对维甲酸上调miRNA let7a2表达的机制进行了进一步的深入研究，并对维甲酸上调miRNA let7a2表达的作用及临床意义进行了初步探讨。首次发现：（1）维甲酸可以在启动子水平上调miRNA let7a2表达；（2）维甲酸对miRNA let7a2启动子的激活作用不是通过维甲酸受体直接作用于miRNA let7a2基因上游的4个维甲酸受体反应元件，而是通过促进NF-kappaB与miRNA let7a2启动子中的NF-kappaB结合元件的结合，从而间接的促进let7a2基因的表达；（3）维甲酸上调miRNA let7a2表达后能够明显降低miRNA let7a2靶基因PRR23A和ZBP1的表达；（4）上调miRNA let7a2表达可以明显抑制肺癌细胞增殖，促进肺癌细胞凋亡；（5）通过肺癌临床标本分析，发现miRNA let7a2和RAR两者的表达相关性为28%，和PRR23A表达相关性为33.3%。本项目基本按照原计划进行，该项目由于课题组全体人员通力合作以及课题经费的及时到位，整个实施过程比较顺利，目前已发表SCI收录论文3篇，投稿1篇。总之，本研究的实施与完成，不仅丰富了我们对miRNA自身表达调控机制及其在肺癌中作用机理的了解，而且为进一步寻找肺癌临床诊治的分子靶标奠定了基础。