结核分支杆菌利福平依赖性生长分子机制及分子标志物研究

近年来，国内实验室发现多耐药结核分支杆菌临床分离株中出现高比例依赖利福平生长的现象，本项目将对这一新现象的分子生物学机制探讨。拟采用蛋白质组和差减杂交技术，以结核分支杆菌的标准株、耐药株（非依赖性生长）和依赖利福平生长株为研究对象，寻找两者与利福平依赖株的差异表达蛋白（基因），结合动物抗血清进一步筛选和验证差异表达的蛋白质，建立耐药菌和利福平依赖菌的蛋白质（基因）表达谱；通过生物信息学分析，筛选并确定耐药结核分支杆菌利福平依赖性生长的分子标志。选择感兴趣的相关基因，利用酵母双杂交技术或免疫共沉淀反应寻找相互作用蛋白；构建分枝杆菌重组表达载体（pYUB295），利用转基因手段观察编码基因或反义核酸对利福平依赖菌的影响，深入探索分支杆菌依赖利福平生长的分子机制。开展本项目研究不仅有助于阐明结核分支杆菌致病性的分子生物学机制，而且将为临床上检测耐多药结核提供了实验依据。