TGF-β1转染的肠肌纤维母细胞在克罗恩病肠上皮－间质转化中的作用及机制研究

克罗恩病(CD)肠纤维化过程中，肠肌纤维母细胞（IMF）发挥了重要作用。但IMF及其活化分泌的TGF-β1在CD肠纤维化过程中的作用机制仍不清楚，尤其在肠上皮－间质转化（EMT）中是否起作用及其机理仍无研究报道。本项目首先构建携带IMF主要分泌的TGF-β1的腺病毒载体(Adeno-TGF-β1)，并体外塑造肠类基底膜结构模型，研究TGF-β1转染的IMF对肠基底膜修复能力和EMT的影响；然后在此基础上，建立TGF-β1转导的小鼠原位CD肠纤维化模型，研究IMF在TGF转导肠纤维化模型中的作用及对EMT的影响；最后研究TGF-β1转染的IMF与Caco-2共培养模式下对肠上皮细胞基因表达谱的变化，阐明TGF-β1转染后IMF促进肠上皮间质化的分子机制。本研究旨在初步揭示TGF-β1转染后IMF对CD肠上皮间质转化及致肠纤维化中的作用，阐明其分子机制，为CD肠纤维化的治疗提供新的思路。

1.构建携带活化TGF-β1 的腺病毒载体(Adeno-TGF-β1)，体外塑造肠类基底膜结构模型：人肠上皮细胞SV40永生化HIEC（ATCC CCL-241）和原代培养的人肠肌纤维母细胞IMF共培养体系，发现活化Adeno-TGF-β1转染的IMF可促进肠类基底膜结构纤维化发生，并与肠上皮细胞间质转化（EMT）发生密切相关；.2.TGF-β1联合TNBS诱导成功建立大鼠肠纤维化模型，对肠道炎症与纤维化的模拟效果较好。.3. 体外构建的活化Adeno-TGF-β1诱导的肠类基底膜结构模型中，TGF-β1竞争性抑制剂骨形态发生蛋白BMP可抑制肠上皮间质转化，缓解纤维化发生。.4.体外TGF-β1诱导建立的大鼠肠纤维化模型中，TGF-β1竞争性抑制剂骨形态发生蛋白BMP可抑制肠上皮间质转化，缓解纤维化发生。BMP竞争性抑制作用与TGF-β1/Smad信号通路相关。