耐热金属蛋白酶的结构与功能研究

从嗜热脂肪芽孢杆菌HY-69中分离纯化得到电泳均一的耐热中性蛋白酶，酶的最适作用温度85℃，90℃的失活半寿期为22分种，由六个分子量为22000的相同亚基组成的寡聚酶，酶活力需要锌，稳定性依赖于钙离子。氨基酸组成和N--未端氨基酸序列与已知的热解素有较大差别，酶的基因用质粒PFDC11作为载体，经HindIII酶切，连接酶连接构建重组DNA并在常混菌枯草芽孢杆菌MI113中克隆并表达，表达产物的酶活力达160u/ml，比野生型菌株提高了五倍，酶切鉴定表明编码酶的基因在4.5kb的外源DNA片段上，通过HindIII、BamHI、PstI、SalI等酶切，分离小片段进行亚克隆，得到2.2和2.7kb的片段进行了部份序列测定，表达产物纯化和用Sephades G100和SDS-PAGE测定其分子量均为26000的单一肽链。