脑卒中相关的一个新基因Nogo蛋白家族表达调控的分子机制研究

脑卒中是严重危害我国中老年人的一种常见疾病，然其病因和发病机制尚未完全阐明。Nogo蛋白家族基因是新近发现的可能参与脑卒中发生的一种新基因。在上一个国家自然科学基金中我们研究发现Nogo 的基因表达在脑梗死大鼠中明显增高，但他通过何种机制起作用尚不清楚。截止目前未见Nogo蛋白家族基因在临床脑卒中疾病上的研究，在已有的前期基础上，本课题采用DHPLC技术对脑卒中患者进行Nogo蛋白家族基因新突变筛查；用PCR分子生物学技术检测Nogo基因突变与脑卒中的关系。用Real-time PCR和Western blot等技术分别检测不同基因型脑卒中外周血单个核细胞中Nogo基因mRNA和蛋白的表达情况。分析Nogo基因突变对mRNA表达丰度及Nogo蛋白表达水平的影响，探讨Nogo基因表达调控的功能，揭示Nogo基因在脑卒中发生、发展中的分子作用机制。从而为脑卒中的基因诊断和疾病的预防奠定基础。

本课题采用单碱基延伸的分子生物学技术检测了缺血性脑卒中一个新的Nogo蛋白家族 (Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C)基因共11个位点多态性，采用DNA测序方法验证我们的结果。探讨Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C基因单核苷酸多态性各等位基因及基因型在中国广西地区人群中的分布频率，比较其在不同种族间分布的差异；并分析Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C基因多态性与缺血性脑卒中的相关性。 同时采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C mRNA在缺血性脑卒中及正常人外周血单个核细胞中的表达情况，分析Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C基因与缺血性脑卒中的相关关系，探讨Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C三个基因在缺血性脑卒中发生中的可能作用及其临床意义。研究结果表明：① 建立了PCR-SBE法检测Nogo蛋白家族 (Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C)基因型的检测技术；成功建立了实时荧光定量PCR的Nogo-A、Nogo-B和 Nogo-C mRNA检测方法，扩增效率高，重复性好。② 研究结果表明Nogo蛋白家族基因在中国广西人群中存在基因多态性，但与其他种族人群比较存在显著性差异，这种差异对于人类学的研究可能起重要的作用。③ 本次研究发现Nogo-A 基因rs1012603 C/T多态性可能与缺血性脑卒中具有相关性，其中T等位基因可能是缺血性脑卒中的遗传易感基因。④ Nogo-A mRNA在缺血性脑卒中外周血单个核细胞中的表达显著高于对照组（P<0.05）。 ⑤ Nogo-A 基因rs1012603 C/T多态性可能影响Nogo-A mRNA的表达水平，携带突变等位基因型的个体可促进Nogo-A mRNA的高度表达进而增加了缺血性脑卒中的发病风险。上述成果为进一步研究Nogo蛋白家族基因的功能提供了实验基础；为缺血性脑卒中的预防、基因诊断和基因治疗提供了理论依据；同时该课题的研究为缺血性脑卒中的基因组学的研究提供前詹性的基础资料，为缺血性脑卒中的蛋白质组学的研究提供广阔的前景。