基于炮制转化-药效评价-靶标亲和的黄柏“盐炙入肾”的科学内涵阐释研究

Processeing with salt-water is a common treated method for Phellodendron chinense Schneid. Previous research has shown its chemical material compound and pharmacological was different via processing. So we put forward that Phellodendron chinense Schneid. processed with salt-water, the effect can be enhanced. So we hypothesize that Phellodendron chinense Schneid. processed with salt-water has better treatment of kidney disease and better effort of entering the kidney. So we follow the research route “chemical compounds transportation - pharmacological effect - target affinity” to verify the oretical. First we expect to find out the general changes of active ingredients after processing with the method of plant metabolomics、serum pharmacochemistry and the compounds into the kidney , detect the content of chemical constituents after processing, then explain the processing mechanism. Meanwhile we investigate adjustment effect of Phellodendron chinense Schneid. For treating the hypothalamus-pituitary-target gland axis dysfunction Through the treatment of diabetes model, kidney yin deficiency model in vivo to describe the biological effects of Phellodendron chinense Schneid. processed with salt-water. The research by affinity chromatography method with kidney target enzyme and the intake and metabolism through proximal tubule cells of crude and processed of Phellodendron chinense Schneid. Ultimately, we will establish the correlation between metabolites and metabolic pathways in the treatment of kidney-yin deficiency; find out the direct action substance and treatment mechanism. Based on above experiments, we can explain processing mechanism of Cortex Phellodendri processed with salt-water.

研究黄柏盐炙后物质基础变化与肾组织作用的关联性，通过现代技术手段解释“盐炙入肾”理论。在此提出“生黄柏原碱入下焦，燥湿泻火；盐黄柏红碱专入肾，滋阴退热”的假说，采用“炮制转化-药效评价-靶标亲和”的研究模式。用植物代谢组学、血清药物化学、入肾成分差异等技术，对黄柏炮制前后的体内外化学成分变化规律进行深入研究；在药理方面通过肾阴虚模型，评价黄柏生制品对下丘脑-垂体-靶腺轴功能紊乱的调节作用，说明盐黄柏对肾功能疾病作用的生物效应；在肾脏的靶向性研究中，使用亲和色谱手段，考察黄柏生制品与肾脏靶标酶的亲和能力，还通过肾近端小管细胞对生制黄柏化学成分的吸收摄入差异，评价盐黄柏的肾脏靶向性，最后采用肾脏代谢组学手段分析黄柏不同炮制品干预大鼠肾阴虚模型内源性代谢生物标记物的变化趋势，建立与治疗肾阴虚证过程的相关代谢物及代谢通路。整体评价黄柏炮制的合理性和科学性，并最终解释黄柏“盐炙入肾”的炮制机制。

基于炮制转化-药效评价-靶标亲和的黄柏“盐炙入肾”的科学内涵阐释研究项目旨在通过现代技术手段以验证并阐释盐炙法代表药黄柏的传统炮制理论—“盐炙入肾”。经研究发现，黄柏在盐炙之后，其原有的生物碱类成分尤其原小檗碱型生物碱，因在盐炙过程中的受热影响，生成了对应的红碱，为小檗红碱、巴马红汀、药根红碱，这些新生的红碱生物碱成分相比原碱成分吸收效果好，并在一定的浓度下抗炎及抗癌的效果要优于原有的生物碱类成分。并在后续的定性及定量研究中，发现转化的生物碱成分与新生成的成分均为盐炙前后的差异性成分，为盐炙后的黄柏药性的改变奠定了化学基础。而在体内的研究过程中，同样发现红碱类成分为差异性的入血成分，为了从“量”上验证黄柏盐炙入肾的理论，进行了黄柏盐炙前后大鼠口服灌胃给药，在肾中生物碱浓度的对比考察，发现同一给药时间后，盐炙品的绝大多数生物碱浓度要高于生品。在神经内分泌网络药效学对比研究中，分别对氢化可的松所致的大鼠肾阴虚模型下的“下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴”及“下丘脑-垂体-甲状腺轴”的药效学进行对比，发现在“下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴”中盐黄柏所产生的各药理药效活性比生黄柏的作用更优，且盐黄柏的多数药效指标存在更优的显著性差异，而在“下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴”中盐黄柏的优势效果并不明显，进而从“效”上验证了“盐炙入肾”的理论。最后从人肾小管上皮细胞HK-2的透过率以及与肾脏靶标酶-溶菌酶的亲和性实验中发现，黄柏的生物碱在HK-2细胞的透过情况主要以外排为主，但盐黄柏的外排现象要弱于生黄柏，此外盐黄柏生物碱与肾脏靶标酶-溶菌酶的亲和性要优于生黄柏，并在肾脏的代谢组学中发现，黄柏可通过纠正泛酸和辅酶A生物合成、苯丙氨酸代谢紊乱而改善模型大鼠肾阴虚的相关症状，而黄柏盐炙之后回调大鼠L-酪氨酸水平更佳，从而对黄柏“盐炙入肾”的理论进行初探，并为中药的归经和炮制所致的药性变化研究提供了新的思路。