差异性细胞捕获及遗传标记联合检测对混合精液的个人识别研究

Y-STR detection may make excluded conclusion when the samples obtained in the gang rape are two or several male semen mixture. As a haploid, the single sperm can't provide all the genetic information. In two mixed semen, this study can detect STR loci of Y chromosome, X chromosome and autosomes together and mtDNA hypervariable region after separation by SSCP techniques. If the content of the two samples is different, we can reach the same identified purpose by the detection of Y chromosomal loci, X chromosomal loci, mtDNA hypervariable region and parts of autosomal STR loci. The suspects can be ruled out or locked by comparison when the content is not significantly different. For the mixed semen of two or more samples: ①capture a single sperm, detect mtDNA hypervariable region, collect the same type of sperm and genotype autosomal STR loci. ②apply the fluorescent-labeled anti-A, anti-B and anti-H antibody to capture the same type of sperm by immunofluorescence staining technology, genotype autosomal STR loci. ③According to the individual differences of the polymorphic antigens of the sperm surface, explore the application of flow cytometry to separate the different individual sperm. Ultimately, our study can provide reliable evidence for the detection of gang rape cases.

在轮奸案中获得的检材为2人及数人男性的精液混合物，Y-STR的检测可能做出排出的结论。单个精子因其为单倍体，不能提供全部遗传信息。本研究针对2人混合精液样品，联合检测Y、X、常染色体STR及用SSCP技术分离检测mtDNA高变区。可能分别检测出高、低拷贝者的Y、X、mtDNA高变区及部分常染色体STR型别，达到同一认定目的；无拷贝量差时，通过比对可排除或锁定嫌疑人。针对2人或多人混合精液样品，①捕获单个精子，检测mtDNA高变区序列，集合同型的精子进行常染色体STR分型。②应用荧光标记的抗A、B及H抗体，以免疫荧光组化技术捕获同型精子，进行常染色体STR分型。③根据精子表面多态性抗原的个体差别（ABO、HLA及筛选其他抗原），探讨应用流式细胞技术分离不同个体精子的方法。最终为轮奸案的侦破提供可靠证据。

应用SSCP法分离两男性混合精液样品的mtDNA高变区Ⅰ与Ⅱ序列，并进行序列分析。研究结果表明,混合精液样品比例超过1：10时可以确定高拷贝者的全部四类遗传标记系统的型别；比例接近时，可完全获得两个嫌疑人全部常染色体与Y、X染色体STR及mtDNA高变区Ⅰ与Ⅱ的分型。在不能排除嫌疑人的情况下,极大的提高了同一认定的机率。制作两男性混合精液样品涂片，应用单细胞捕获技术，成功地对混合样品中单精子细胞的mtDNA 高变区Ⅰ和Ⅱ进行PCR扩增并行序列分析，根据mtDNA 序列分析的结果，分别富集具有相同序列的精子细胞DNA，在最少16个精子细胞的情况下成功地进行了常染色体STR的分型检测。可以解决在嫌疑人mtDNA 高变区DNA序列不同的前提下，实现了对混合精液样品不同个体的同一认定难题。理论上，在具有足够量精子细胞的前提下，应用本技术可以解决多人轮奸案中犯罪嫌疑人的同一认定难题。