ES细胞微环境细胞培养体系的建立及其在眼表重建中的应用

摘要：通过制备自体ES细胞、MSC、iPS细胞，并诱导其定向分化是目前获得适用的(足量和低免疫原性的)种子细胞的主要方法之一，但此类方法建立的细胞存在成瘤倾向和混杂其它细胞等不足，限制了其在临床的应用。综合Bin Zhang等（2008）与Pearton等（2005）的研究发现和多利绵羊诞生的事实，以及我们在进行诱导ES细胞定向分化研究中的体会，认为ES细胞微环境具有延缓甚至逆转成体细胞老化的作用。据此，我们设计建立了胚胎干细胞微环境细胞培养体系，拟利用该体系扩增角膜旁中央部角膜上皮细胞，分别以我们发明的脱细胞角膜基质为载体构建板层角膜，和以酶-底物降解纯细胞植片制作法制作可供移植的纯细胞植片，辅以我们设计的"眼表生物膜固定装置"重建角膜缘干细胞缺乏的兔眼表。本项目旨在进一步完善该培养体系，建立一种利用少量角膜上皮细胞重建眼表的新方法。

通过制备自体ES细胞、MSC、iPS细胞并诱导其定向分化是目前获得适用的（足量和低免疫原性的）种子细胞的主要方法之一，但此类方法建立的种子细胞存在成瘤倾向和混杂其他细胞等不足，限制了其在临床中的应用。研究发现ES微环境具有延缓甚至成体细胞老化的作用，据此本研究建立了胚胎干细胞微环境培养体系，该体系可以在短时间内促进角膜上皮细胞，结膜上皮细胞，内皮细胞和表皮细胞的增殖而获得足量的适用的低免疫原性的自体种子细胞，该方法安全、高效、可控。利用该体系扩增的角膜旁中央角膜上皮细胞，分别以我们发明的脱细胞角膜基质为载体构建板层角膜、和以酶-底物降解纯细胞片制作法、离心速构法制作的可供移植的纯细胞植片，辅以我们设计的“眼表生物膜固定装置”重建了角膜缘干细胞缺乏的兔眼表，从而建立了一种利用少量角膜上皮细胞重建眼表的新方法。. 共发表文章11篇，其中SCI收录9篇，中华系列核心期刊2篇，编写教材/专著2本，一篇博士论文“磷脂酶A2脱细胞方法制备组织工程角膜支架(作者武征 ，指导教师：王智崇)”获得2010年广东省优秀博士学位论文奖和2011年全国百篇优秀博士学位论文提名奖，一篇研究论文“using acellular porcine limbal stroma for rabbit limbal stem cell microenviroment reconstruction”获得“第三届南粤科技创新优秀学术论文二等奖”，1篇研究论文“The use of phospholipase A(2) to prepare acellular procine corneal stroma as tissue engineering scaffold” 获得中山大学医科“十一五最具影响力研究论文”。新申报3项国家发明专利，1项美国专利，1项欧盟专利，获得国家发明专利授权4项，1项产品（去细胞异种角膜基质）通过中国药品与生物制品检定所检测；培养博士研究生10名，硕士生1名，中青年人才2名，出站博士后3名，在读博士生6名。