藏獐牙菜中拮抗PLA2-II活性的有效成分筛选及其在创伤性胰腺炎中拮抗活性的研究

PLA2-II在创伤性胰腺炎病程中，对胰腺及周围组织坏死的发生和发展起着重要作用，是引起后续机体全身严重病变的关键成分，但目前对拮抗PLA2-II活性的药物研究较为缺乏。藏医药经典记载和方剂应用证实，獐牙菜属对胰腺创伤和胰腺炎治疗具有有效作用，且在前期实验中我们发现藏獐牙菜对PLA2-II活性的拮抗效能在獐牙菜属中是最强的。本项目在酶活性拮抗理论基础上，利用计算机辅助生物传感垂钓技术，筛选藏獐牙菜中拮抗PLA2-II的活性物质，完成物质分离和成分鉴定，旨在揭示藏獐牙菜中拮抗PLA2-II活性成分的物质基础，为创伤性胰腺炎的新药研究提供活性单体或先导化合物，对于有关藏獐牙菜的藏药经典方剂的现代化研究具有较大的实际意义；继而在体外和大鼠创伤性胰腺炎模型内进行该单体的作用效能和拮抗活性的实验研究，了解其治疗创伤性胰腺炎的作用机理，为治疗创伤性胰腺炎的藏獐牙菜单体成分的新药开发提供实验和理论依据。

背景 创伤性胰腺炎发病率逐年增高，病死率高达20％以上。目前已知PLA2-II在创伤性胰腺炎病程中，是引起后续机体全身严重病变的关键成分，且对拮抗PLA2-II活性的有效药物研究较为缺乏。藏医药经典记载和方剂应用证实，獐牙菜属对胰腺创伤和胰腺炎治疗有效，加之前期实验中我们发现藏獐牙菜对PLA2-II活性的拮抗效能在獐牙菜属中是最强的。.研究方向及内容 方向为胰腺创伤救治研究，结合动物模型构建及中草药成分的生物传感器技术完成相关技术内容：1.稳定的创伤性胰腺炎动物模型的改建；2.筛选并提取出藏獐牙菜中拮抗PLA2-II酶活性的有效成分；3.在动物模型上验证该成分拮抗PLA2-II酶活性的作用及延缓或预防创伤性胰腺炎病情恶化的效应。.关键数据及结果 1.完成了创伤性胰腺炎动物模型改构条件的探索，对致伤环境的模拟及周围脏器保护技术完成了相应改进，并明确了恒定的2.3cm为作用距离，冲击作用时间为2ms，作用面积为1cm2作为冲击气流的致伤条件。证实了改建后的大鼠急性胰腺创伤模型能更好地模仿人体胰腺创伤的实际状况，具有典型、稳定的病理及酶学变化特征。2. 生物传感器样品池PLA2-II包被量为251 arc second，Kd为484nM，完成有效包被及藏獐牙菜水煎液亲和力测定；回收藏獐牙菜水煎液与PLA2-II结合的物质，硅胶柱层析、高效液相色谱层析分离提取水煎液，证实10-15组分及42min流出峰中物质亲合作用较强。对该组分完成质谱、红外光谱及核磁共振谱分析检测验证该化合物为獐牙菜苦甙，即：5-乙烯基-6-(beta-D-吡喃葡糖氧基)-4,4a,5,6-四氢-4a-羟基-1H,3H-吡喃并[3,4-C]吡喃-1-酮。3.将獐牙菜苦甙体内作用于创伤性胰腺炎大鼠模型，证实其在可显著抑制血清及组织内PLA2-II活性，并可提高模型存活率，发挥良好的保护作用。.科学意义 本研究揭示了藏獐牙菜治疗创伤性胰腺炎的物质基础为獐牙菜苦甙，为该病的新药研究提供了有效活性单体；此外初步验证了獐牙菜苦甙拮抗PLA2-II的活性及治疗创伤性胰腺炎的作用，为实现治疗创伤性胰腺炎的新药开发提供实验依据。