日本血吸虫性发育成熟相关microRNAs的分离鉴定和功能研究

血吸虫雌雄异体，雌雄合抱是雌虫性发育成熟的关键，性发育成熟的雌虫所产大量虫卵又是造成宿主病理损害和疾病传播的根本原因。目前，有关血吸虫生殖发育的分子机理认识仍非常有限。近年来，microRNAs已证明在生物体的生长发育和其它生命活动中扮演重要角色。为此，本研究建立日本血吸虫雌雄虫性发育成熟microRNA库，分析microRNAs在血吸虫不同发育时期的表达，鉴定参与血吸虫性发育成熟的microRNAs，研究这些microRNAs的组织定位和靶基因，并利用anti-microRNA寡核苷酸对microRNAs在血吸虫发育和性成熟中的功能进行初步研究，研究结果不仅对阐明血吸虫的生殖发育机理具有重要的理论意义，同时可为研制发展高效抗血吸虫生殖发育疫苗和药物提供新思路，具有重要的现实意义。

血吸虫雌雄异体，研究表明雌雄合抱是雌虫发育和性成熟的关键，性发育成熟的雌虫所产大量虫卵是造成宿主病理损害和疾病再传播的根本原因。目前，有关血吸虫生殖发育的分子机理认识非常有限。最近几年，越来越多的研究表明微小RNAs（microRNAs, miRNAs）参与调控生物体的生长发育等诸多重要生命活动，对此研究已成为生命科学的热点之一。为此，本项目以miRNAs为切入点，研究miRNA在血吸虫发育和性成熟中的功能。首先，分离了日本血吸虫性成熟3个关键时期（雌雄虫合抱期，配子发育期和成熟产卵期）的小RNA。然后，对分离的小RNA进行序列测定，鉴定并发现其中的miRNAs，研究miRNAs的靶基因及功能。结果表明本项目共获得了38个日本血吸虫miRNAs，其中10个miRNAs新发现miRNAs。进一步研究表明，其中10个miRNAs在血吸虫雄虫高表达，4个miRNAs在雌虫高表达。利用生物信息学和antibody pull down技术，鉴定数个血吸虫miRNAs的靶基因，并对其进行了验证。利用anti-miRNAs抑制特定miRNA 功能，可显著降低虫体的卵壳前体蛋白的表达，提示此miRNA分子可能参与血吸虫产卵，对揭示日本血吸虫性发育成熟的分子基础具有重要意义。同时，对发现新的抗血吸虫生殖发育的药物靶点提供了重要切入点。