人源尘肺病噬菌体单链抗体库的构建及筛选

尘肺病的危害依然十分严重，其发生发展过程与免疫调节密切相关。筛选能够反映粉尘接触或尘肺发生发展过程的标志性抗体，对解释尘肺发病分子机制、进行尘肺发病的早期预警和诊断可能具有重要的意义。拟采用噬菌体单链抗体库技术，构建人源尘肺病抗体库，并对抗体库进行筛选鉴定，然后通过人群病例对照研究验证其时效特征，寻找尘肺病特异性抗体生物标志，阐述其在尘肺病发生发展过程中的变化规律，为进一步完善尘肺健康监护、早期预警、诊断及病程监测提供可能的辅助指标，并为尘肺病的免疫治疗提供新的思路。

目的：建立人源尘肺噬菌体单链抗体库，并进行筛选、鉴定，进而通过流行病学调查进行人群鉴定，寻找可能的尘肺病特异性自身抗体。方法：采用噬菌体单链抗体库技术建立人源尘肺噬菌体单链抗体库，然后进行富集、筛选、鉴定；通过病例对照流行病学研究，采用Elisa法对体外鉴定出的单链抗体进行人群鉴定。结果：本研究成功构建了库容为2.4×107的全人源尘肺病噬菌体单链抗体库，抗体库多样性良好。经比对，鉴定出6个强阳性scFv克隆依次为血管内皮生长因子（VEGF）scFv，白介素-18（IL-18）scFv，热休克蛋白-70.1（HSP-70.1）scFv，人表皮生长因子受体3（Human epidermal growth factor receptor 3，HER3）scFv，颗粒酶B（Granzyme B，GrB）scFv和类风湿因子（RF）scFv。收集尘肺组557例、接尘组308例、对照组393例共1258例调查对象血清，ELISA 法检测各组血清中IL-18抗体、颗粒酶B抗体、表皮生长因子受体3抗体、类风湿因子和血管内皮生长因子抗体的表达。检测结果显示各组人群血清中IL-18 Ab、VEGF Ab、GrBAb和RF Ab的表达与尘肺发病进程有关，分析时对调查对象进一步进行了年龄分层。结果显示年龄对5种抗体的表达水平存在影响，尘肺组、对照组人群血清中5种抗体的表达水平均有随年龄增加而增高的趋势。对各组30~50岁的调查对象进行分析发现接尘组中RFAb、VEGFAb水平最高，病例组其次，对照组最低，且差异有统计学意义（P<0.05）。在尘肺组不同分期人群血清中IL-18 Ab、HER3 Ab、GrBAb和RF Ab浓度差异均无统计学意义（P>0.05）；尘肺组壹期和贰期人群血清中的VEGF Ab的表达和观察对象相比差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：本研究成功了构建人源尘肺噬菌体单链抗体库，并筛选、鉴定出6个强阳性scFv克隆，通过流行病学调查，对鉴定出的尘肺病的5种特异性抗体进行了验证，发现GrBAb、RF Ab和 VEGF Ab与尘肺的发生密切相关，值得进一步探讨其影响机制。RF Ab和 VEGF Ab在接尘组中表达水平最高，二者可能是尘肺早期变化的指标。