血管内皮钙粘蛋白（VE-cadherin）和血管通透性对侧支血管生长作用的研究

血管内皮钙粘蛋白（VE-cadherin）是血管内皮细胞粘附连接的主要成分，是控制血管通透性的关键分子，在血管形成和毛细血管发生过程中起十分重要的作用，已成为研究毛细血管通透性和阻断肿瘤血管生长的重要靶点。本项目在目前生长因子等治疗缺血性疾病临床实验失败和侧支循环研究处于瓶颈阶段以及血管通透性有利于毛细血管发生等研究背景下，拟采用结扎大鼠股动脉诱导侧支血管生长模型，以共聚焦免疫荧光术和电子显微镜技术研究VE-cadherin在侧支血管发育过程中的表达模式以及粘附连接结构的变化；通过阻断VE-cadherin或沉默该基因的方法，探讨其对侧支血管的生长和在通透性变化、炎症形成过程中所起的作用；并通过外援性NO供体的干预，探讨通过外源性物质改变血管通透性，加速侧支血管炎症形成和促进侧支血管生长的前景，为更深入阐明侧支血管的生长机制、促进侧支血管的生长提供新的思路和开辟新的途径。

本项目采用大鼠后肢股动脉结扎诱导侧支血管生长模型和体外血管内皮细胞培养方法，应用共聚焦免疫荧光组织化学、蛋白印迹（Western blot）、组织学、改良的四氧化三铅血管灌注血管造影等方法，进行了如下研究：研究了VE-cadherin在侧支血管生长过程中的表达模式及粘附连接的变化；探讨了VE-cadherin对侧支血管和内皮细胞通透性变化和炎症形成的作用；并通过NO供体及一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）抑制剂的干预，探讨通过外源性物质改变血管内皮通透性促进侧支血管炎症形成和促进侧支血管生长的前景，并在体外培养的血管内皮细胞进一步验证NO对VE-cadherin表达、细胞通透性、内皮细胞增殖的影响。取得以下结果：（1）大鼠股动脉结扎后侧支血管数量增加、管腔面积增加，可诱导侧支血管的生长，VE-cadherin形成的粘附连接促进侧支血管的生长，同时也参与血管通透性的调节。（2）外源性增加NO水平，可通过抑制VE-cadherin的表达和破坏细胞粘附连接引起血管通透性增加，侧支血管炎症细胞增加，血管处于增殖状态，促进侧支血管生长。相反，NOS抑制剂能抑制eNOS表达，内源性NO合成减少，可通过增加VE-cadherin的表达和稳定粘附连接结构，引起血通透性降低，侧支血管炎症细胞减少，抑制侧支血管生长。验证了课题的设想。（3）体外实验验证了NO具有促进血管内皮细胞增殖、调节VE-cadherin表达，影响细胞粘附连接及通透性的作用，NO可能通过这些作用而促进侧支血管生长。本研究结果与项目原预期结果一致，丰富了侧支血管的生长机制，为促进侧支血管的生长提供新的思路和开辟新的途径。