基于Hippo信号通路探讨乳康饮抑制乳腺癌转移的作用机制

The recurrence and metastasis of breast cancer is the main cause of treatment failure and death, there is a very important clinical significance on how to control metastasis effectively and improve the quality of life. Hippo signal pathway plays an important role in breast cancer metastasis, but the mechanism is not clear. In this research, spontaneous metastasis model of breast cancer is constructed by culturing highly metastatic cell line MDA-MB-231 from human breast cancer of poor clinical prognosis and transplanting in situ to BALB/c nu/nu nude mice. By means of immunohistochemistry, flow cytometry, Western blotting, Real time-PCR and other experimental technologies, based on a breakthrough point of Hippo signal pathway, the role of signal pathway core molecule Mst1/2, Lats1/2 and effector molecules Yap, TAZ in breast cancer metastasis is discussed. And the effect of Rukangyin on Hippo signal pathway core molecule, effector molecules expression and phosphorylation is further observed in vivo and in vitro approach. From organ, cell and molecular level, the inhibition mechanism of Shugan Jianpi traditional Chinese medicine in metastasis of breast cancer is investigated to look for the inhibition target of metastasis of breast cancer, provide some scientific theory basis and safe effective methods on the treatment of breast cancer and its metastasis.

乳腺癌复发转移是导致治疗失败和病人死亡的最主要原因，如何有效的控制转移，提高生存质量，具有极为重要的临床意义。Hippo信号通路在乳腺癌转移中发挥重要作用，但具体机制不清。本课题选取临床预后不良的人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231进行细胞培养和BALB/c nu/nu裸鼠原位移植，构建乳腺癌自发性转移模型，以免疫荧光化学法、流式细胞术、Western blotting、Real time-PCR等实验技术，以Hippo 信号通路为切入点，探讨信号通路核心分子Mst1/2、 Lats1/2及效应分子Yap、TAZ在乳腺癌转移中的作用，进一步通过体内和体外两条途径，观察乳康饮对Hippo信号通路核心分子、效应分子表达和磷酸化的影响，从器官、细胞及分子水平上探讨疏肝健脾中药抑制乳腺癌转移的作用机制，寻找抑制乳腺癌转移的作用靶点，为乳腺癌转移的中药治疗提供科学的理论依据和安全有效的方法。

乳腺癌发病逐渐年轻化，复发转移是导致患者死亡的最主要原因，由于转移是一个多基因参与和调控的复杂生物过程，涉及到癌细胞的脱落、迁移与转移灶的生长，转移的潜能与基因在不同个体肿瘤细胞内表达程度相关。中医药防治乳腺癌复发与转移有着整体的优势和丰富的治疗途径，以扶正培本为主，祛邪抗癌为辅的综合治疗，能够抑制肿瘤细胞的生长，改善症状，提高患者的生存质量和延长生存期。Hippo 信号通路与多种人体肿瘤的发生、发展有着密切的联系，并且与多个信号通路相互交联，共同调控机体复杂的生物学行为，在乳腺癌发生、发展和转移中起到关键作用。但Hippo信号通路在乳腺癌发展过程中作用机制不清，有待进一步研究。.为探讨乳康饮抑制乳腺癌转移的作用，寻找抑制乳腺癌转移的作用靶点，选取乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231进行培养和BALB/c nu/nu裸鼠原位移植，构建乳腺癌自发性转移模型，给予中药乳康饮及含药血清干预，免疫荧光化学法、流式细胞、Western blotting、Real-time PCR等实验技术，检测Hippo 信号通路核心分子Mst1、 Lats1及效应分子Yap、TAZ在乳腺癌中的表达。结果显示乳康饮及拆方组含药血清均能抑制MDA-MB-231细胞的增殖，促进其凋亡，乳康饮组与5-FU组差异无统计学意义，但乳康饮全方组优于拆方组( P<0.01)；Western blotting检测结果：体内及体外实验中，乳康饮、5-FU 组、疏肝理气拆方组均可下调YAP、TAZ蛋白的表达，上调p-YAP、p-TAZ蛋白的表达(均P<0.05)；乳康饮全方组和5-FU组，对Mst1、Lats1起正向调控作用，上调Mst1、Lats1的表达并促进其磷酸化，乳康饮优于各拆方组(均P<0.01)； Real time-PCR结果显示：乳康饮及各拆方组含药血清均能下调YAP、TAZ mRNA的表达，上调Mst1、Lats1mRNA的表达，乳康饮组优于各拆方组（均P<0.01），与氟尿嘧啶组差异有统计学意义（均P<0.05）。. 因此，乳康饮可以调控Hippo通路的传导，促进核心分子Mst1、Lats1的表达及其磷酸化，并通过促进YAP、TAZ的磷酸化,抑制Yap、TAZ入核，从而发挥对乳腺癌转移的抑制作用。