皂苷类固定相的制备和分离机制研究

高效液相色谱键合硅胶固定相已成为近代液相色谱发展的主流，新型键合固定相分子设计、合成、性能及分离机理研究是当今HPLC的重要课题。皂苷的化学结构中，苷元具有不同程度的亲脂性，糖链具有较强的亲水性，以皂苷作为液相色谱固定相，可以同时产生疏水和亲水作用，具有更为广泛的分离能力和应用范围。其分子结构中的羟基为皂苷的键合、衍生及改性提供了结构基础。人参皂苷Rg1和Rh1分子结构简单，纯品价廉易得。本课题组制备出的Rg1固定相对三七总皂苷显示出了良好的分离能力。在此基础上，以现代分析手段进一步深入研究人参皂苷Rg1和Rh1键合硅胶固定相结构，并将其应用于云南道地药材如重楼、绞股蓝和三七中皂苷成分的色谱研究；将其衍生化，获得10-15种衍生化固定相，通过对手性分子的拆分，研究分离机制。通过项目的研究将筛选出分离效果良好、具有较好应用前景的固定相2-3种，发表研究论文5-6 篇，申请专利1-2 项。

本课题制备出两类皂苷键合硅胶固定相，Rg1-SiO2和薯蓣皂苷- SiO2，分别经衍生化反应得到10种衍生化固定相。以固体核磁、元素分析、热重分析、红外光谱、电镜扫描等技术，对这些固定相进行结构表征，结果显示，皂苷已键合至硅胶表面，且已发生衍生化。采用不同溶质评价这些固定相的性能，筛选出6种分离性能好、应用范围广的色谱固定相，分别是Rg1-SiO2，苯基异氰酸酯- Rg1-SiO2，3,5-二甲基苯基异氰酸酯- Rg1-SiO2；薯蓣皂苷- SiO2，苯基异氰酸酯-薯蓣皂苷-SiO2，3,5-二甲基苯基异氰酸酯-薯蓣皂苷-SiO2。采用不同溶质评价Rg1-SiO2的色谱性能，表明Rg1-SiO2有典型的反相色谱性能。采用Rg1-SiO2测定血塞通中六中皂苷的含量，并完成三七总皂苷的色谱指纹图谱。采用苯基异氰酸酯- Rg1-SiO2对10种氨基酸进行了手性拆分，3,5-二甲基苯基异氰酸酯- Rg1-SiO2对14种氨基醇类药物进行手性拆分，同时探讨了分离机理。采用不同溶质评价薯蓣皂苷-SiO2的色谱性能，表明薯蓣皂苷-SiO2有典型的反相色谱性能。采用薯蓣皂苷-SiO2测定宫血宁中五中皂苷的含量，并完成宫血宁胶囊的色谱指纹图谱。采用苯基异氰酸酯-薯蓣皂苷-SiO2、3,5-二甲基苯基异氰酸酯-薯蓣皂苷-SiO2对10种氨基酸进行了手性拆分，同时探讨了分离机理。本课题的研究成果，为寻找和开发新型高效液相色谱固定相提供了思路，同时扩大了天然产物皂苷的应用范围。本课题发表论文5篇，公开发明专利2项，参与课题的4名硕士研究生获得学位，1名完成毕业论文。