机械另件表面的微精处理

为了利用胚胎干细胞基因打靶技术建立凝血因子FIX基因被敲除的血友病B的小鼠模型，经基因组噬菌体文库筛选获得mFIX基因组DNA片段，在限制性内切酶酶切图谱分析，部分序列分析等结构分析的基础上，利用包含第1和2外显子的4.5kb片段和包含第7、8外显子的1.8kb分别作长短臂，用Neo和HSV-tk基因分别作正向和负向选择基因，建立了基因打靶的置换型载体；引进ES细胞株后，建立摸索了培养要条件，并用电穿孔法将线性化打靶载体DNA转入ES细胞，在G418和GANC等药物双向选择下，获得药物抗性细胞，经PCR和基因组Southern杂交鉴定同源重组的分子，结果后，获得4FIX基因被敲除的ES细胞克隆，进行了ES细胞襄胚腔移植和嵌合体育种。初步建立了ES细胞基因打靶技术的研究体系。