特异专一靶向于ORAI1的CRAC通道抑制剂的筛选和鉴定

临床迫切需要毒副作用更小、安全性更高的免疫抑制剂，用于器官移植、自身免疫病、变态反应疾病以及慢性炎症疾病病人的治疗。特异作用在ORAI1上的CRAC通道抑制剂可作为更安全的新型免疫抑制剂。为了开发特异专一靶向于ORAI1的CRAC通道抑制剂，本项目在前期工作基础上，利用已有钙成像筛选模型，并继续发展超高通量筛选模型，进行大规模药物筛选；并利用体内外免疫试验、膜片钳技术、免疫共沉淀和质谱结合、化学蛋白质组学、基因表达谱分析等多种方法和技术，来鉴定筛选到的化合物是否具有免疫抑制活性，是否特异专一作用在ORAI1上。该筛选和鉴定平台可帮助开发新一代特异性更强、安全性更高的免疫抑制剂。

临床迫切需要毒副作用更小、安全性更高的免疫抑制剂，用于器官移植、自身免疫病、变态反应疾病以及慢性炎症疾病病人的治疗。特异作用在ORAI1 上的 CRAC 通道抑制剂可作为更安全的新型免疫抑制剂。为了开发特异专一靶向于ORAI1的 CRAC 通道抑制剂，本项目1）利用已有钙成像筛选模型，共进行38880个化合物的大规模筛选，并利用体外免疫试验、膜片钳技术来验证筛选到的化合物；2）建立四环素调控表达MSS和AOCRAC等自开放CRAC通道的细胞系，帮助验证化合物作用的靶蛋白，创造性的解决了鉴定化合物作用靶蛋白是ORAI1还是STIM1这一难题；3）建立ORAI1-STIM1、ORAI2-STIM1、ORAI3-STIM1、ORAI1-STIM2、ORAI2-STIM2、ORAI3-STIM2等6个细胞系，帮助分析化合物作用的特异性以及可能作用的位点；4）对筛出物Old3_4进行结构改造，共得到大约150个结构衍生物，对所有化合物进行钙成像验证，结果表明其中部分化合物抑制活性得到提高，并且意外得到一个作用相反的化合物ZHZ090，该化合物可以在TG基础上进一步激活CRAC通道；5）Old3_4和ZHZ090结构高度相似，但作用相反，提示ORAI1蛋白上有一个可以被小分子化合物双向调节的靶位点。通过该基金的支持,我们完成了大量的非常有价值的工作，不仅为CRAC通道药物筛选、靶蛋白鉴定、特异性鉴定建立了非常好的平台；得到了有较好抑制活性的化合物；并开启了一些重要研究的开始：对Old3_4和ZHZ090作用位点和机理的研究，将会揭示ORAI1上重要的作用位点，为CRAC通道的基础研究和未来的药物设计提供重要信息。